NT注射液的Beagle犬藥代動力學及長期毒性研究.pdf

1、目的:觀察NT注射液單次及反復(fù)靜脈輸注Beagle犬后的藥動學特征,動物毒性反應(yīng)、毒性靶器官和可能的延遲毒性,為NT注射液的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法:藥代動力學研究選用Beagle犬18只,按性別隨機分為3組,每組6只,雌雄各半,分別為低劑量組(5mg/kg)、中劑量組(15mg/kg)和高劑量組(45mg/kg)。中劑量組連續(xù)給藥4次,每天給藥一次,其他各組均單次給藥,用輸液泵控制給藥時長為30min。分別于首次和末次(中劑

2、量組)給藥前、給藥開始后5、15、30、35、45、60、90、120、150、180min,于前肢或后肢皮下靜脈取血約1ml,分離血漿后檢測血藥濃度。長期毒性研究選用Beagle犬40只,按性別隨機分為5組,每組8只,雌雄各半。分別為生理鹽水對照組、溶媒對照組、供試品低(10mg/kg)、中(30 mg/kg)、高(90mg/kg)劑量組。生理鹽水對照組給予0.9％氯化鈉注射液;溶媒對照組給予NT注射液輔料。5組動物的給藥容量均為9m

3、l/kg,用輸液泵控制給藥時長為30min。每天給藥1次,連續(xù)給藥28天。試驗期間對動物進行生理指標觀察,包括體重、體溫、心電圖、眼科、血細胞計數(shù)、凝血功能、血液生化、尿常規(guī)等。高劑量動物由于毒性反應(yīng)較大,給藥4次后安樂死。其他組別動物(每組雌雄各3只動物)于第28次給藥后次日進行安樂死,將剩余的雌雄各1只動物停藥觀察4周后再實施安樂死。對死亡及安樂死動物進行大體解剖觀察,并對主要臟器組織進行病理學鏡檢。
　　結(jié)果:Beagle犬

4、在給予NT注射液后,雌雄動物表現(xiàn)出相似的藥動學特征。單次靜脈給藥后,低、中、高劑量組的t1/2分別為2.74±0.95、4.44±2.27和11.00±2.24min,Cmax分別為927.87±187.74、4458.84±1259.01、21260.54±10915.83ng/ml, AUC0-180min分別為385.03±89.93、1657.16±535.55、9227.95±4301.73h?ng/kg。在5-45mg/kg

5、劑量范圍內(nèi),Cmax和AUC均隨劑量增加而增大。低、中、高劑量組的給藥劑量比為1:3:9,Cmax及AUC0-180 min比值分別為1:4.81:22.91及1:4.30:23.97。中劑量組連續(xù)給藥4次,末次給藥的t1/2為11.24±10.80min,Cmax和AUC0-180 min分別為2539.73±703.48ng/ml和1407.59±319.57h?ng/kg,平均蓄積因子為0.90。長期毒性研究給藥第5天,90mg/

6、kg劑量組1只動物死亡,其余7只動物由于瀕死而進行了安樂死;10mg/kg劑量組動物未見與供試品毒性相關(guān)的異常反應(yīng)。30mg/kg劑量組除1只動物陸續(xù)出現(xiàn)唾液分泌過多、剩食、少便或無便、精神不振、牙垢、齒齦潮紅、眼分泌物外,其它動物未見與供試品毒性相關(guān)的異常反應(yīng)。90mg/kg劑量組動物給藥第2天開始陸續(xù)出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道等的異常反應(yīng),主要表現(xiàn)為呼吸急促、喘息、腹式呼吸、呼吸困難、鼻分泌物,精神不振、俯臥、無力、痙攣,軟便、

7、稀便、便血、惡心、嘔吐、肛周污穢、少便或無便、剩食,眼分泌物,臨床癥狀隨給藥時間延長呈加重趨勢,于第5天死亡或安樂死。試驗期間,10和30mg/kg劑量組動物的體重、體溫、心電圖參數(shù)、眼科檢查、尿液指標未見有毒理學意義的變化。10mg/kg劑量組的血細胞計數(shù)、凝血功能指標和血液生化指標未見有毒理學意義的變化。與同期生理鹽水對照組比較,90mg/kg劑量組動物第5天的體重、體溫降低,部分動物的心電圖波形異常,表現(xiàn)為P波高尖,與大體解剖所見

8、右心房/右心室擴張相吻合,但組織學檢查未見右心房/右心室有明顯的病理改變。血漿AST和CK未見異常。與生理鹽水對照組比較,30mg/kg劑量組給藥第5、14和28天的Mono和90mg/kg劑量組第5天的Mono升高。30mg/kg劑量組第5、28天的FIB升高,90mg/kg劑量組第5天的PT縮短,APTT延長,FIB升高。30mg/kg劑量組第14、28天的TP,第5、14和28天的GLB升高,第14、28天的A/G降低。90mg/

9、kg劑量組第5天的A/G降低,ALP、TP、GLB、TCH升高。30和90mg/kg劑量組其它血液學指標和血液生化指標未見有毒理學意義的變化。病理檢查結(jié)果顯示,第5天進行解剖的90mg/kg劑量組8只動物均可見肺臟膨大,呈暗紅色或紅白相間,伴或不伴氣管內(nèi)有泡沫狀液體,胸腺、脾臟小;顯微鏡下的形態(tài)學特點為肺泡壁毛細血管擴張充血,肺泡腔內(nèi)可見漿液性滲出物,其中有大量紅細胞、一定量纖維素、少量中性粒細胞和肺泡巨噬細胞,胸腺、脾臟、淋巴結(jié)的淋巴

10、細胞空竭/壞死,伴有淋巴細胞數(shù)量減少。給藥期和恢復(fù)期結(jié)束時按計劃安樂死后解剖的10和30mg/kg劑量組動物均未見與供試品相關(guān)的病理改變。在10~90mg/kg劑量范圍內(nèi),NT的平均Cmax及AUC(0-藥后60min)隨劑量增加而增加。首次給藥后,低、中、高劑量組NT的平均Cmax和AUC(0-藥后60min)比值分別為1:4.98:15.08及1:5.60:19.50;第28次給藥后,低、中劑量組NT的平均Cmax和AUC(0-藥后

11、60min)比值分別為1:4.35及1:4.83。低、中劑量組動物第28天與第1天的AUC(0-藥后60min)和Cmax的比率均在0.90-1.3之間,未見明顯藥物蓄積。給藥期間,溶媒對照組1只動物,10mg/kg劑量組2只動物,30mg/kg劑量組2只動物給藥局部腫脹(僅持續(xù)1天),其它動物給藥局部未見異常。給藥局部腫脹的發(fā)生率和持續(xù)時間未見劑量-反應(yīng)相關(guān)性。給藥局部顯微鏡檢查結(jié)果顯示,各組均有部分動物發(fā)生靜脈周圍炎。生理鹽水對照組

12、和90mg/kg劑量組可見皮下出血,溶媒對照組和10、30、90mg/kg劑量組個別動物可見靜脈炎。生理鹽水對照組與各實驗組動物靜脈周圍炎和皮下出血的發(fā)生率和病變程度相似,無明顯劑量反應(yīng)關(guān)系,可能為注射針的機械性損傷。
　　結(jié)論:NT在Beagle犬體內(nèi)的消除較快,血藥濃度隨劑量增加而增加,血藥濃度增加比例大于劑量增加比例,但無藥物體內(nèi)蓄積,且無性別差異。NT注射液反復(fù)靜脈輸注給予Beagle犬4周的安全劑量為10mg/kg,致死