過敏反應(yīng)動(dòng)物模型的建立及在雙黃連注射過敏反應(yīng)檢測中的應(yīng)用.pdf

1、過敏反應(yīng)動(dòng)物模型對于藥物的過敏反應(yīng)研究來說十分重要，是篩選藥物中過敏原的前提，也是預(yù)防臨床藥物過敏反應(yīng)發(fā)生的依據(jù)。但現(xiàn)有的動(dòng)物模型檢測過敏反應(yīng)的靈敏性和準(zhǔn)確性并不理想，無法對藥物的臨床過敏反皮進(jìn)行有效預(yù)測。如何提高動(dòng)物模型的檢測靈敏性和預(yù)測準(zhǔn)確率是當(dāng)前過敏反應(yīng)研究亟待解決的問題。雙黃連注射劑作為中藥注射劑的一個(gè)代表藥物，近期屢次出現(xiàn)嚴(yán)重過敏反應(yīng)，并已引起社會的高度重視。但雙黃連注射劑生產(chǎn)工藝不穩(wěn)定、成分復(fù)雜且含有過敏原含量較少，這都對過

2、敏反應(yīng)動(dòng)物模型的建立提出更高要求。
　　 本研究通過改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方案和優(yōu)選檢測指標(biāo)，嘗試建立大鼠、豚鼠和小鼠等多種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的過敏反應(yīng)模型，并分別應(yīng)用于雙黃連注射劑的過敏反應(yīng)檢測，以期建立合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物過敏反應(yīng)模型，為中藥注射劑的臨床前過敏反應(yīng)評價(jià)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 1.大鼠過敏反應(yīng)模型的建立及應(yīng)用
　　 目的：尋找過敏反應(yīng)敏感的大鼠種屬，建立完善的過敏反應(yīng)檢測模型，并應(yīng)用于雙黃連注射劑的過敏反應(yīng)檢測。方法：比較Wi

3、star大鼠、SD大鼠和BN大鼠在過敏反應(yīng)檢測中的敏感性，通過加用佐劑、皮下注射和致敏五次等方法提高大鼠模型檢測的靈敏度，考察血清總IgE、特異性IgE、細(xì)胞因子、全身和局部癥狀、過敏介質(zhì)、血壓以及病理學(xué)檢查等作為過敏反應(yīng)判定指標(biāo)的可行性，并應(yīng)用于雙黃連注射劑的過敏反應(yīng)檢測。結(jié)果：相比Wistar大鼠和SD大鼠，BN大鼠更容易對較少致敏劑量的卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)發(fā)生過敏反應(yīng)。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)方案改進(jìn)，BN大鼠模型對OVA的最低

4、致敏劑量可達(dá)0.01mg，并可利用總IgE、特異性IgE、IL-4、癥狀和過敏介質(zhì)等多項(xiàng)指標(biāo)檢測出雙黃連注射劑的過敏反應(yīng)潛能。結(jié)論：BN大鼠模型能靈敏、準(zhǔn)確和全面地對少量過敏原進(jìn)行檢測，并能對雙黃連注射劑的過敏反應(yīng)有效檢測，有望應(yīng)用于雙黃連注射劑中過敏原成分篩選和其它中藥注射劑的過敏反應(yīng)研究。
　　 2.豚鼠過敏反應(yīng)模型的建立及應(yīng)用
　　 目的：建立一種靈敏、定量的豚鼠過敏反應(yīng)模型，并應(yīng)用于雙黃連注射劑的過敏反應(yīng)檢測。方

5、法：在癥狀觀察的基礎(chǔ)上，通過確定最佳激發(fā)時(shí)間、增加過敏介質(zhì)檢測和病理學(xué)檢查的內(nèi)容，提高豚鼠過敏反應(yīng)模型檢測的靈敏性和定量性，并應(yīng)用于雙黃連注射劑的過敏反應(yīng)檢測。結(jié)果：相對文獻(xiàn)報(bào)道的0.3 mg的豚鼠最低致敏劑量，該豚鼠模型對OVA的最低致敏劑量可達(dá)到0.01mg；但該豚鼠模型對雙黃連注射劑只表現(xiàn)出很弱的過敏反應(yīng)癥狀，且激發(fā)后未發(fā)現(xiàn)過敏介質(zhì)釋放和肺部病理學(xué)異常。結(jié)論：豚鼠過敏反應(yīng)模型對OVA等大分子過敏原的檢測十分敏感，但不能有效檢測雙黃

6、連注射劑的過敏反應(yīng)，提示雙黃連注射劑中的過敏成分可能為小分子過敏原；該豚鼠模型可作為BN大鼠模型檢測中藥注射劑過敏反應(yīng)的一種輔助手段。
　　 3.小鼠過敏反應(yīng)模型的建立及應(yīng)用
　　 目的：建立一種小鼠過敏反應(yīng)模型，并應(yīng)用于雙黃連注射劑過敏反應(yīng)的檢測。方法。BALB/c小鼠通過皮下注射致敏，利用抗體檢測、全身反應(yīng)觀察、足部滲透性試驗(yàn)和病理學(xué)檢查等指標(biāo)來判定過敏反應(yīng)的發(fā)生，初步建立小鼠過敏反應(yīng)模型，并應(yīng)用于雙黃連注射劑的過敏