環(huán)瓜氨酸肽模擬表位自身免疫反應(yīng)的測定及在RA中的意義.pdf

1、目的：為了研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者對環(huán)瓜氨酸肽(CCP)的體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)，分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測患者血清中抗CCP抗體，采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(ELIspot)與MHC肽四聚體(tetramer)流式細(xì)胞術(shù)檢測患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)中對CCP抗原特異的自身反應(yīng)T細(xì)胞(CCP—ART細(xì)胞)，觀察所測抗CCP抗體、CCP—ART細(xì)胞與RA患者臨床癥狀及常用血清學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性，分析兩者對RA的診斷與

2、病情判斷價值。 方法：采用鏈霉親合素(SA)預(yù)包被反應(yīng)板，使生物素化CCP(bio—CCP)與之結(jié)合并固相化，建立檢測抗CCP抗體的間接ELISA法，并進(jìn)行方法學(xué)考核和臨床病例檢測；采用ELIspot研究RA患者的CCP—ARI、細(xì)胞(在CCP作用下特異性分泌IFN—γ和IL-4的的斑點(diǎn)形成細(xì)胞)陽性率；用MHC肽四聚體流式細(xì)胞術(shù)研究CD4+CD8—CCP—四聚體陽性細(xì)胞(以其作為CCP—ART細(xì)胞)。對檢測抗CCP抗體的ELI

3、ASA法與檢測CCP—ART細(xì)胞的ELIspot和MHC肽四聚體流式細(xì)胞術(shù)對RA的診斷價值以及與臨床癥狀和相關(guān)血清學(xué)指標(biāo)的關(guān)系進(jìn)行分析和臨床應(yīng)用評價。 結(jié)果：用鏈霉親合素—生物素化CCP預(yù)包被的ELISA檢測抗CCP抗體對RA的診斷敏感性為69.4％，特異性為96.8％，陽性預(yù)測值為89.1％，陰性預(yù)測值為94.1％，陽性似然比為19.28，陰性似然比為0.317，Youden指數(shù)為0.658。與德國歐蒙公司試劑比較，兩法所測抗

4、CCP抗體水平以吸光度/cut—off值的比值表示顯著相關(guān)(n=61，r=0.92531，P＜0.001)。在所統(tǒng)計的168例血清樣本中，兩法同時陽性者60例，同時陰性者105例，總符合率達(dá)98.2％，結(jié)果具有高度一致性(Kappa=0.961，P＜0.001)。ROC曲線分析結(jié)果顯示，本法所測抗CCP抗體對RA診斷準(zhǔn)確性達(dá)到較高水平，曲線下面積(AUCRROC)達(dá)0.901。在13例診斷為早期RA患者中，有10例抗CCP抗體陽性(陽性

5、率76.9％)，未發(fā)現(xiàn)抗CCP抗體與RA患者臨床癥狀、疾病活動指標(biāo)血沉(ESR)，C反應(yīng)蛋白(CRP)及類風(fēng)濕因子(RF)水平有關(guān)。 結(jié)論：成功建立鏈霉親合素．生物素化CCP預(yù)包被的檢測抗CCP抗體的ELISA系統(tǒng)，方法敏感、特異、可靠，可用于RA的常規(guī)實(shí)驗室診斷。開發(fā)后可制成價廉的試劑盒，取代進(jìn)口試劑。以CCP抗原刺激PBMC，用ELIspot和MHC肽四聚體流式細(xì)胞術(shù)兩種方法檢測對CCP特異的ART細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，RA患者體