抗瓜氨酸化蛋白特異性免疫復(fù)合物在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的作用.pdf

1、目的：建立檢測血清抗瓜氨酸蛋白自身抗體(ACPA)特異性免疫復(fù)合物(ACPA-IC)的ELISA技術(shù)。提取并純化類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者血清中的ACPA-IC,并對ACPA-IC中的抗原進行鑒定。研究ACPA-IC對RA患者成纖維樣滑膜細胞(FLS)功能的影響。
　　 方法：⑴建立檢測人血清ACPA-IC的ELISA技術(shù)。收集RA、SLE患者以及健康人血清,用PEG6000沉淀法提取血清中IC,檢測IC中的ACPA-IC水平,并

2、與年齡、ACPA、類風(fēng)濕因子(RF)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、抗“O”、血沉(ESR)、IgG、IgA、IgM、補體C3、補體C4等參數(shù)進行相關(guān)性分析。⑵采用G蛋白免疫親和層析法,純化RA患者血清中的IC,Western-blotting檢測IC中四種自身抗原。⑶收集手術(shù)切除的RA患者關(guān)節(jié)滑膜組織,應(yīng)用膠原酶法消化提取滑膜組織細胞,體外培養(yǎng)成纖維樣滑膜細胞(FLS)。⑷用純化的IC刺激FLS,采用CCK-8方法檢測刺激后FLS的增殖情況,

3、ELISA檢測培養(yǎng)上清中FLS分泌的IL-8含量。
　　 結(jié)果：①成功建立檢測血清ACPA-IC水平的ELISA技術(shù)。ACPA陽性RA患者血清中ACPA-IC水平明顯高于ACPA陰性RA患者ACPA-IC,RA患者血清ACPA-IC水平顯著高于SLE患者和正常對照,并與ACPA濃度、RF和ESR呈正相關(guān)性,其r值分別為0.978、0.471和0.44,P值均小于0.05。而與年齡、CRP、抗“O”、IgG、lea、IgM、補體C

4、3、補體C4等參數(shù)無相關(guān)性。②通過G蛋白免疫層析法從RA血清中提取IC,SDS-PAGE鑒定IC的結(jié)果表明,用G蛋白柱免疫親和層析法從血清中可純化出純度較高的抗原抗體IC。Western-blotting結(jié)果顯示,ACPA+RA患者血清IC含有含有較高水平的GRP75抗原,Grp75主要定位在FLSs胞漿中。③CCK-8細胞增殖試驗結(jié)果表明,RA患者血清ACPA—IC可以明顯促進FLS增殖；并可刺激FLS分泌大量IL-8(P≤0.05)