氧化苦參堿對感染性休克大鼠心肺組織的保護作用.pdf

1、目的： 本實驗在盲腸節(jié)扎穿孔法（cecal ligation and puncture，CLP）復制大鼠感染性休克（septic shock）模型的基礎上，給予氧化苦參堿（oxymatrine，OMT）注射液進行干預，旨在：1．觀察OMT對肺組織NF-κB通路的影響并分析其可能的作用機制；2．從心肌細胞能量代謝、心肌及線粒體（mitochondrion，Mit）超微結構和鈣超載等方面，對感染性休克大鼠心功能、心肌Mit結構和功能

2、的改變及OMT對其保護作用進行較深入的研究。揭示OMT對感染性休克大鼠心、肺功能的保護作用及其機制，為臨床上感染性休克的防治及OMT藥理作用的研究與臨床應用提供基礎實驗依據(jù)。 方法： 采用CLP法復制大鼠感染性休克動物模型，隨機將56只雄性、SD大鼠分為假手術組、OMT對照組、模型（CLP）組、CLP+OMT高、中、低劑量組、陽性對照（CLP+地塞米松）組。觀察OMT對感染性休克大鼠血氣、肺組織W/D比值、肺系數(shù)、肺含水

3、量等指標及肺組織病理學改變（大體改變及肺病理組織切片）的影響，并采用免疫組化法檢測肺組織NF-κB（p65）及IκB-α的活性，放射免疫分析法測定肺組織勻漿中腫瘤壞死因子-a（tumour necrosis factor-α，TNF-α）及白細胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）蛋白含量的改變。同時，觀察OMT對感染性休克大鼠各項心功能參數(shù)的影響。比色法測定各組大鼠血漿乳酸脫氫酶（lactic dehydrogenase，

4、LDH）的活性和心肌組織琥珀酸脫氫酶（succinic dehydrogenase，SDH）活性以及心肌鈣含量。制備心肌組織光鏡標本及心肌電鏡標本，觀察心肌組織病理學及超微結構的改變。 結果： 與假手術組比較：模型組大鼠肺組織NF-κB（p65）及IκB-α的表達明顯升高（均P<0.05），并與TNF-a及IL-6含量的上升相一致（TNF-α及IL-6含量分別增加205％和242％）。同時動脈血PaO2及SaO2值分別下

5、降34％和23％（P<0.01）；PaCO2增加30％（P<0.05），HCO3-增加31％（P<0.05）；肺組織W/D比值、肺系數(shù)及肺含水量分別增加36％、34％和11％（均P<0.05），肺組織充血、水腫、中性粒細胞大量浸潤及透明膜形成，提示肺組織結構及肺通氣/換氣功能嚴重受損。在給予不同劑量的OMT干預后，OMT能顯著抑制肺組織NF-κB（p65）及IκB-α的活性（P<0.05），降低肺組織勻漿中TNF-α及IL-6的含量（T

6、NF-α P<0.05；IL-6 P<0.01），提高動脈血PaO2、SaO2含量（均P<0.05），降低PaCO2、HCO3-含量（均P<0.05）；降低肺組織W/D比值、肺系數(shù)及肺含水量（均P<0.05）；并減輕肺組織充血、水腫和中性粒細胞大量浸潤及透明膜形成等炎癥反應，并且該作用在OMT-高、中劑量組與陽性對照（CLP+地塞米松組）組的結果相一致。 同時，模型組大鼠心肌組織光鏡下可見心內膜下廣泛的心肌結構紊亂；大范圍的炎性

7、細胞浸潤，多為單核細胞，間雜有少量淋巴細胞和中性粒細胞，也可見毛細血管擴張、出血；間質水腫及成纖維細胞增殖；不同程度的細胞壞死和組織纖維化。超微結構表現(xiàn)為：線粒體顯著腫脹，內膜和外膜的完整性明顯受到破壞，嵴模糊紊亂，數(shù)量減少，融合破壞，部分嵴消失或空泡化，破裂的膜形成小泡或空泡，線粒體內腔擴大，出現(xiàn)無定型電子致密性顆粒，甚至斷裂、溶解或消失，內容物溢出，基質模糊不清，并可見破碎線粒體。同時可見心肌纖維排列紊亂，有溶解和空泡形成；胞核固縮

8、明顯，染色質邊集；閏盤不連續(xù)，有斷裂、溶解。同假手術組相比，模型組大鼠HR增加15％（P<0.01）、LVEDP增加47％（P<0.01）；MAP降低33％、LVSP減少24％、LVdp/dtmax減少38％、-LVdp/dtmax減少32％（均P<0.01）；血漿LDH活性增加35％（P<0.01）；心肌組織SDH活性下降28％（P<0.01）；鈣含量增加34％（P<0.01）。在給予不同劑量的OMT干預后，心肌損傷有不同程度的減輕，

9、表現(xiàn)為心肌結構基本正常，水腫及變性、壞死等改變明顯減輕，但仍伴有少量的炎性細胞浸潤及滲出等改變。電鏡下可見心肌纖維排列正常，胞核損傷有不同程度的減輕等。心肌線粒體損傷程度有不同程度的減輕，多數(shù)線粒體結構較完整，嵴致密，排列較整齊，部分嵴模糊，排列尚規(guī)則，線粒體腫脹減輕，少數(shù)線粒體的損傷尚未完全恢復，以CLP+OMT-低劑量組表現(xiàn)最為明顯。同時，OMT+CLP-高劑量組及OMT+CLP-中劑量組HR、LVEDP明顯降低；MAP、LVSP、

10、LVdp/dtmax等明顯升高；-LVdp/dtmax增加（均P<0.01）。血漿LDH活性降低（P<0.01）；心肌組織SDH活性升高（P<0.01）；鈣含量減少（P<0.01）。OMT+CLP-低劑量組只有MAP、±LVdp/dtmax、血漿LDH活性及心肌組織SDH活性等指標明顯改善（P<0.01或P<0.05），而HR、LVEDP、LVSP及心肌組織鈣含量等無明顯改善（均P>0.05）。OMT+地塞米松組與假手術組比較各指標均無

11、明顯差異；與模型組比較上述各指標均有明顯改善（均P<0.01）；與CLP+OMT-高、中劑量組比較各指標均無明顯差異（均P>0.05）；與CLP+OMT-低劑量組比較各指標均有明顯差異（均P<0.05）。 結論： 1．氧化苦參堿能夠抑制NF-κB的活化，減少促炎因子（TNF-α，IL-6）的生成，對感染性休克大鼠肺損傷性病變起到保護作用。該作用可能與氧化苦參堿抑制細菌、病毒、LPS等對NIK的活化有關。 2．氧化