紅景天多糖體外抗柯薩奇B-,3-病毒實驗研究.pdf

1、目的本課題通過建立的體外病毒性心肌炎(VMC)細胞模型，應(yīng)用細胞生物學(xué)技術(shù)探討紅景天多糖(RSA)的體外抗柯薩奇B3病毒(CVB3)作用和對心肌細胞保護作用機制，探究其作用環(huán)節(jié)(藥物靶點)，為RSA的進一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。方法在VERO細胞中加入不同稀釋度紅景天多糖后，感染CVB3病毒觀察細胞病變，MTT染色比較各組間活細胞數(shù)的變化，分析紅景天多糖對病毒感染后的VERO細胞是否有保護作用；采用差速貼壁法培養(yǎng)原代乳鼠心肌細胞，鏡下觀察心

2、肌細胞搏動次數(shù)，使用α-actin免疫組化法鑒定培養(yǎng)心肌細胞的純度；以CVB3病毒感染心肌細胞建立病毒性心肌炎細胞模型，于感染病毒1小時后加入不同濃度的紅景天多糖，逐日觀察心肌細胞搏動次數(shù)、細胞病變(CPE)，MTT染色以比較各組間存活細胞數(shù)的差別；病毒繁殖抑制實驗比較不同分組間半數(shù)組織感染量(TCID50)的差別以驗證紅景天多糖在VERO細胞及心肌細胞上的抗病毒活性；紫外分光光度法測定原代乳鼠心肌細胞培養(yǎng)上清液中心肌酶LDH、CK-M

3、B的活性變化。采用流式細胞術(shù)和對凋亡相關(guān)基因表達影響的RT-PCR檢測比較各組間細胞凋亡的差別。結(jié)果紅景天多糖在VERO細胞和原代乳鼠心肌細胞試驗中可有效抑制柯薩奇B3病毒引起的細胞病變(P＜0.05，P＜0.01)；對病毒的繁殖有抑制作用(對數(shù)值升高一個以上數(shù)量級)，降低心肌酶(LDH、CK-MB)的釋放，對細胞凋亡有抑制作用(P＜0.01)。結(jié)論紅景天多糖對柯薩奇B3病毒感染的VERO細胞和原代乳鼠心肌細胞具有一定的保護作用。對柯薩