CD97、CD55在胃癌細胞株中的表達和siRNA對CD97基因的沉默效應(yīng).pdf

1、第一部分 CD97、CD55在胃癌細胞株中的表達及其和胃癌細胞遷移、侵襲能力的關(guān)系 目的:系統(tǒng)地檢測CD97和CD55基因和蛋白在胃癌細胞株中的表達水平及各胃癌細胞株的遷移和侵襲能力,探尋CD97和CD55基因和蛋白表達水平和胃癌細胞株的遷移、侵襲能力之間的關(guān)系. 方法:采用231 31、AGS、BGC823、KATO-Ⅲ、MGC803和SGC79016種胃癌細胞株.RT-PCR檢測CD97mRNA不同異構(gòu)體和cd55m

2、RNA的表達,免疫熒光流式細胞技術(shù)檢測CD97EGF和CD97stalk和cd55蛋白的表達,用細胞遷移和侵襲試驗研究各胃癌細胞株的遷移和侵襲能力. 結(jié)果:CD97EGF三種異構(gòu)體mRNA、CD97TM7 mRNA以及CD55mRNA在各胃癌細胞株L}J均有不同程度的表達,但相互之間在各細胞株中的表達強弱沒有相關(guān)性(P>0.05).CD97EGF和stalk抗原和CD55抗原在各胃癌細胞株中均有不同程度的表達,CD97EGF抗原

3、和stalk抗原的表達強度有相火性(r=i.000,P<0.001),CD97EGF、stalk抗原和CD55抗原之間在表達強度上均沒有相關(guān)性(p>0.05).MGC803細胞的遷移和侵襲細胞數(shù)最多,KATO-Ⅲ細胞的遷移和侵袋細胞數(shù)最少,各胃癌細胞株的遷移和轉(zhuǎn)移細胞數(shù)存在著一定的相關(guān)性(r=0.943.P=0.005).CD97EGF抗原、stalk抗原的表達強度和細胞的遷移和侵襲能力有著很強的相關(guān)性(p<0.05),CD55抗原在表

4、達比例和強度上和細胞的遷移和侵襲能力均沒有相關(guān)性. 結(jié)論:CD97和CD55基因和蛋白在各胃癌細胞株中均有不同程度的表達,CD97EGF抗原、stalk抗原的表達強度和細胞的遷移和侵襲能力有著很強的相關(guān)性. 第二部分siRNA干擾CD97的表達及其對胃癌細胞遷移、侵襲能力的影響 目的:設(shè)計合成有效的siRNA-CD97,體外轉(zhuǎn)染胃癌細胞株,觀察 CD97表達改變及其和胃癌細胞株遷移、侵襲能力改變的關(guān)系,進一步明確

5、CD97在胃癌細胞牛長、分化、遷移和侵袋能力上的作用. 方法:采用AGS和MGC803種胃癌細胞株.針對CD97基岡設(shè)計siRNA,采用化學(xué)法合成,篩選出最有效的CD97-siRNA.CD97-siRNA轉(zhuǎn)染胃癌細胞后48小時用Real time PCR檢測CD97mRNA表達的改變,72小時用免疫熒光流式細胞技術(shù)檢測CD97蛋白表達的改變,MTT法檢測細胞增殖能力的改變,并用細胞遷移和侵襲試驗檢測細胞株遷移和侵襲能力的變化.

6、 結(jié)果:在siRNA-CD97轉(zhuǎn)染后48 h,Real time PCR結(jié)果顯示對于AGS和MGGC803,CD97mRNA的表達量相對于未轉(zhuǎn)染的細胞分別下降了(89.34±9.95)﹪和(95.42±1.93)﹪.轉(zhuǎn)染后72h,流式細胞儀檢測結(jié)果顯示對于AGS,CD97EGF和CD97stalk抗原的表達強度相對于未轉(zhuǎn)染的細胞分別下降了(19.29±3.45)﹪和(30.11±5.93)﹪,對于MGC803,CD97EGF和CD

7、97stalk抗原的表達強度相對于未轉(zhuǎn)染的細胞分別下降了(26.25±5.73)﹪和(16.22±3.23)﹪.MTT法檢測結(jié)果顯示,siRNA-CD97轉(zhuǎn)染前后細胞吸光度值的差異沒有顯著性.遷移和侵襲實驗結(jié)果顯示對于AGS,siRNA-CD97轉(zhuǎn)染組遷移和侵襲細胞相對于未轉(zhuǎn)染組分別下降了(67.63±12.03)﹪和(68.02±15.63)﹪,對于MGC803,siRNA-CD97轉(zhuǎn)染組遷移和侵襲細胞相對于未轉(zhuǎn)染組分別下降了(14.