CathepsinZ和CD97對胃癌細胞株生物學特性的影響及分子機制和臨床研究.pdf

1、目的：本研究希望通過對CD97和CathepsinZ(CTSZ)對胃癌細胞株生物學特性的影響及分子機制研究，探索CD97和CTSZ在胃癌細胞侵襲力改變中的作用及作用機制。同時通過研究胃癌患者胃癌組織中CTSZ的表達及臨床意義，探討其在腎癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用，并進一步了解其在臨床方面的價值，為胃癌的早期診斷和免疫治療提供理論基礎。
　　方法：本實驗首先通過PCR及western blot對不同胃癌細胞株的CTSZ基因水平及總蛋白

2、進行檢測，隨后分別以pcDNA3.1及pGCsilencer質粒作為載體，重組構建CTSZ過表達質粒及siRNA CTSZ干擾質粒。通過轉染胃癌細胞得到CTSZ過表達克隆和CTSZ RNAi克隆，并通過共聚焦顯微鏡、流式細胞術、invasion assay、刮痕試驗等觀察其對胃癌細胞生物學行為造成的影響。此外，進一步研究可能的細胞骨架信號通路，探討CTSZ和CD97影響胃癌細胞侵襲性的作用機制。應用免疫組化對胃癌患者的正常組織、癌旁組織

3、、癌組織進行染色，檢測CTSZ表達水平。同時觀察胃癌組織CTSZ表達水平在胃癌TNM不同分期時的差異。
　　結果：①不同胃癌細胞株的CTSZ基因與總蛋白表達水平不同;②CTSZ與胃癌細胞中溶酶體的分布區(qū)域相同;③與未轉染組相比，過表達質粒pcDNA3.1-CTSZ轉染胃癌細胞后，細胞骨架呈現(xiàn)向四周發(fā)散狀改變，細胞周期縮短，侵襲性和遷徙能力上升。干擾克隆pGCsilencer-CTSZ轉染胃癌細胞后，遷徙相關蛋白及周期相關蛋白表達水

4、平下降，侵襲性和遷徙能力下降;④轉錄因子篩查中發(fā)現(xiàn)與未轉染組相比，轉錄因子SP1在pcDNA3.1-CD97過表達組增高，在pcDNA3.1-CD97+JNK信號通路抑制劑SP600125組表達下降;⑤免疫共沉淀(chips)檢測發(fā)現(xiàn)SP1轉錄因子作用于CTSZ轉錄起始點上游1000bp，和雙熒光素酶報告基因檢測到的CD97同樣作用于CTSZ轉錄起始點上游1000bp的結果一致;⑥Western blot分析發(fā)現(xiàn)與未轉染組相比，pGCs

5、ilencer-SP1及pcDNA3.1-SP1轉染胃癌細胞后，CTSZ表達相應的下降和升高。同時pcDNA3.1-CD97轉染胃癌細胞，CTSZ表達升高。 pcDNA3.1-CD97+和pGCsilencer-SP1共轉染胃癌細胞，CTSZ表達下降。正常組織、癌旁組織和胃癌組織中CTSZ表達水平相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，CTSZ表達水平在胃癌的TNM分期組內差異有統(tǒng)計學義(P＜0.05)。
　　結論：CD97在胃癌

6、細胞中的表達和腫瘤的侵襲性有著密切的聯(lián)系，這一現(xiàn)象已經得到認同，但是對CD97在惡性腫瘤中作用機制的研究仍然處于起步階段。本研究首次通過CTSZ過表達克隆及siRNA-CTSZ干擾克隆的構建，對CTSZ在胃癌中的作用做出了初步的探索，發(fā)現(xiàn)CTSZ表達強度和胃癌細胞的侵襲及遷徙能力呈正相關的觀點。雖然部分結果還需進一步的動物實驗驗證，但本研究通過對CTSZ基因在胃癌細胞中的初步探討，揭示了CTSZ基因的特點，預示了CTSZ適合作為胃癌的新