阿托伐他汀預(yù)處理對(duì)高血脂大鼠局灶性腦缺血-再灌注后IL-6、SOCS-3表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:模擬人類疾病病理生理演變過程，探討阿托伐他汀(atorvastatin，ATO)預(yù)處理對(duì)白細(xì)胞介素-6(IL-6)和細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子-3(SOCS-3)在高血脂大鼠腦缺血再灌注后動(dòng)態(tài)表達(dá)及相互影響，為阿托伐他汀對(duì)高脂血癥大鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:1.高血脂大鼠模型制作:選取SD大鼠95只（體重在120～140g），隨機(jī)分2組:普通飼料喂養(yǎng)組(n=5)，高脂飼料喂養(yǎng)組(n=90)，4周后，

2、分別對(duì)普通飼料組及高脂飼料組大鼠斷尾取血，化驗(yàn)血總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的含量并進(jìn)行比較，存在明顯差異(P＜0.01)，高血脂大鼠造模成功;2.將制備的高血脂模型大鼠90只隨機(jī)分為高血脂模型組(HLP，n=15)、高血脂腦缺血再灌注對(duì)照組(HLP/CIR，n=25)、小劑量(5mg/kg)ATO預(yù)處理組(SATO，n=25)、大劑量(10mg/kg) ATO預(yù)

3、處理組(LATO，n=25)。腦缺血再灌注模型的制備遵循改良線栓法操作流程，高脂模型組只進(jìn)行相應(yīng)手術(shù)操作，暴露頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈及頸內(nèi)動(dòng)脈，但不做插線操作。ATO預(yù)處理組術(shù)前每晚每只予以不同劑量ATO溶媒灌胃，一天一次，連續(xù)14天。其余各組相同時(shí)間每天每只灌胃等量生理鹽水。將HLP/CIR、SATO、及LATO3組分為缺血3小時(shí)后再灌注6h、12h、24h、3d4個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)，每時(shí)間點(diǎn)5只大鼠，于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)行MRI掃描，并用生理鹽水心臟

4、灌注后立即斷頭取腦，依據(jù)MRI掃描圖像選擇梗死區(qū)域切片，觀察相應(yīng)指標(biāo)。于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)觀察各實(shí)驗(yàn)組大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分、干濕重法測梗死灶側(cè)腦組織含水量、采用HE染色法觀察腦組織病理變化、ELASA法檢測IL-6含量、RT-PCR法檢測SOCS-3因子表達(dá)量。另外在術(shù)后24h時(shí)間點(diǎn)，HLP/CIR、SATO、LATO組每組多增加5只大鼠行MRI成像后立刻斷頭取腦進(jìn)行TTC染色，觀察梗死灶的部位與范圍。所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

5、分析。
　　結(jié)果:1.高血脂大鼠腦缺再灌注后，腦缺血再灌注對(duì)照組(HLP/CIR)、小劑量阿托伐他汀干預(yù)組(SATO)、大劑量阿托伐他汀干預(yù)組(LATO)均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺失，病灶側(cè)腦組織含水量升高，梗死灶周圍出現(xiàn)細(xì)胞變性、壞死及炎性細(xì)胞浸潤等缺血表現(xiàn)，上述情況均在24h達(dá)高峰，后逐漸下降。磁共振(MRI)成像及TTC染色可清晰顯示梗死灶的部位及范圍，且保持一致。2.白細(xì)胞介素-6（IL-6）及細(xì)胞因信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子-3（

6、SOCS-3）表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化:高血脂大鼠在缺血再灌注后6h時(shí)IL-6及SOCS-3因子的表達(dá)開始升高，與高脂膜型組(HLP)比較(P＜0.05)，差異具有顯著性，高峰值出現(xiàn)在灌注后24h，以后逐漸下降，3d后仍維持在較高水平。3.高血脂大鼠經(jīng)阿托伐他汀(ATO)預(yù)處理后上述各指標(biāo)的變化情況:①高血脂大鼠缺血再灌注后，SATO和LATO2組神經(jīng)功能缺失癥狀較HLP/CIR組改善，神經(jīng)功能評(píng)分較HLP/CIR組明顯升高(P＜0.05)，SA

7、TO與HLP/CIR組在缺血再灌注6h比較差異無顯著性(P＞0.05)，但再灌注12h、24h、3d均出現(xiàn)顯著差異(P＜0.05)。LATO組各時(shí)間點(diǎn)與HLP/CIR組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。②ATO預(yù)處理組腦組織含水量減少，與HLP/CIR組比較，再灌注6h，SATO組相對(duì)HLP/CIR組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，再灌注12h、24h、3d均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。LATO組相對(duì)于HLP/CIR組，各觀察時(shí)間點(diǎn)均

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。③再灌注24hSATO組及LATO組腦梗死體積較HLP/CIR組明顯減少(P＜0.05)。④與HLP/CIR組比較，HE染色結(jié)果顯示兩ATO預(yù)處理組在梗死灶側(cè)均可見細(xì)胞水腫、呈“氣球樣變”，細(xì)胞核變性、固縮變小或消失，細(xì)胞間隙增寬，細(xì)胞周圍及小血管旁可見炎性細(xì)胞浸潤，但程度均小于HLP/CIR組，其中LATO組細(xì)胞變性壞死及炎性細(xì)胞浸潤程度均好于SATO組。⑤缺血再灌注后6h到3d，SATO及LATO組IL

9、-6在梗死灶側(cè)的含量均出現(xiàn)較明顯的下降，與HLP/CIR組比較均出現(xiàn)顯著差異(P＜0.05)。⑥缺血再灌注后，SATO及LATO2組SOCS-3在梗死側(cè)含量較HLP/CIR組明顯增加，缺血再灌注12h到3d兩ATO預(yù)處理組與HLP/CIR組比較均出現(xiàn)顯著差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.自由進(jìn)食建立高血脂大鼠模型能充分模擬人類疾病演變的病理生理過程，在此基礎(chǔ)上應(yīng)用改良的線栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型，與人的缺血再灌注演

10、變過程相似，是研究藥物預(yù)處理的極佳模型。2.高血脂大鼠腦缺血再灌注后出現(xiàn):神經(jīng)功能缺失、腦梗死、腦組織含水量增加及IL-6和SOCS-3因子的表達(dá)增加，且這些指標(biāo)的改變存在時(shí)效關(guān)系及相關(guān)性，說明神經(jīng)功能的缺失與缺血再灌注后腦水腫及炎細(xì)胞浸潤及炎性因子的表達(dá)有關(guān)。3.ATO預(yù)處理在高血脂大鼠腦缺血再灌注損傷中可抑制炎性因子IL-6的表達(dá)、上調(diào)因子SOCS-3的表達(dá)，減輕腦水腫，降低炎性細(xì)胞浸潤，縮小梗死體積，具有腦保護(hù)作用。4.ATO對(duì)高