B組輪狀病毒W(wǎng)H-2株vp7基因的原核表達(dá)及抗體的制備.pdf

1、輪狀病毒(Rotavirus，RV)為呼腸孤病毒科，輪狀病毒屬，已被確認(rèn)為是引起全世界嬰幼兒急性胃腸炎最常見的病因。在成人中，輪狀病毒同樣也會(huì)引起急性腹瀉，其中成人腹瀉輪狀病毒(ADRV)是我國洪濤院士于1983年首先發(fā)現(xiàn)的一種人B組輪狀病毒，它在我國許多地區(qū)曾引起大規(guī)模以成人為主的霍亂樣腹瀉的暴發(fā)流行。人B組輪狀病毒感染性、傳播強(qiáng)度、引起的臨床癥狀等都很嚴(yán)重，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出A組輪狀病毒，因而引起國內(nèi)外學(xué)者的廣泛重視和研究。本文研究體外擴(kuò)增到

2、人B組輪狀病毒W(wǎng)H-2株vp7基因的ORF區(qū)，所構(gòu)建的重組體pGEX-KG-VP7經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，SDS-PAGE分析，表達(dá)了pGEX-KG-VP7融合蛋白并制備了多克隆抗血清，并對(duì)初步純化的蛋白做了Western-blot鑒定，結(jié)果在預(yù)測(cè)的相應(yīng)分子量處得到一條特異的反應(yīng)帶，從而證實(shí)該融合蛋白具有良好的免疫學(xué)活性。因此所表達(dá)的蛋白和制備的抗體不但為研究結(jié)構(gòu)與功能提供了物質(zhì)基礎(chǔ)也可用于建立人GBRv的ELISA方法，為GBRV所引起的疾病

3、預(yù)防、診斷和治療等流行病學(xué)研究和臨床診斷奠定了基礎(chǔ)，具有重要實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。具體研究?jī)?nèi)容如下： 第一章全面概述了B組輪狀病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、基因組結(jié)構(gòu)及編碼的蛋白質(zhì)、體外培養(yǎng)、流行病學(xué)、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及臨床診斷與治療等方面的研究進(jìn)展。 第二章將VP7結(jié)構(gòu)蛋白的基因克隆到pGEX-KG載體上并進(jìn)行了誘導(dǎo)表達(dá)純化與多克隆抗體制備。即從含有人B組輪狀病毒W(wǎng)H-2株全長(zhǎng)vp7基因的pUCmT-vp7重組質(zhì)粒上擴(kuò)增出人B組輪狀病毒

4、WH-2株vp7基因ORF區(qū)，將擴(kuò)增產(chǎn)物插入融合表達(dá)載體pGEX-KG中構(gòu)建重組pGEX-KG-VP7質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21用IPTG誘導(dǎo)，SDS-PAGE分析顯示表達(dá)了相對(duì)分子量為53.4 kDa的pGEX-KG-VP7融合蛋白。將pGEX-KG-VP7融合蛋白作為抗原，免疫新西蘭兔，制備了多克隆抗體。制備的抗血清經(jīng)同樣誘導(dǎo)表達(dá)的表達(dá)載體pGEX-KG表達(dá)產(chǎn)物吸收后1：500倍稀釋后用Western Blot分析，與5