脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染AFP構(gòu)建樹突狀細(xì)胞肝癌瘤苗及其體內(nèi)外特異性抗肝癌效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染AFP構(gòu)建樹突狀細(xì)胞肝癌瘤苗及其體內(nèi)外特異性抗肝癌效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究姓名：范強(qiáng)申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：組織學(xué)與胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：鐘翠平2001.10.1中定掬婺子表達(dá)。3、用脂質(zhì)體可以成功地轉(zhuǎn)染外源性基因，構(gòu)建AFPDC肝癌瘤苗，F(xiàn)ACS證實(shí)轉(zhuǎn)染率達(dá)12％。免疫組化、SDS—PAGE蛋白電泳和Westernblot方法均證實(shí)目的基因獲得有效表達(dá)、并能分泌到培養(yǎng)上清中。轉(zhuǎn)基因產(chǎn)生的AFP并不誘導(dǎo)DC凋亡，反能促進(jìn)D

2、C的DNA合成。4、RT—PCR、FACS和免疫細(xì)胞化學(xué)等方法檢測發(fā)現(xiàn)，AFPDC肝癌瘤苗可以明顯提高ILl2的合成和分泌；明顯上調(diào)B7分子和MHC分子表達(dá)。MLR功能大幅提高，CD4和CD8T細(xì)胞的增殖都明顯。5、AFPDC肝癌瘤苗可刺激產(chǎn)生HepaI一6特異性CTL，F(xiàn)ACS、RTPCR和免疫組化顯示，DC瘤苗組T細(xì)胞合成、分泌IFN—Y增加。MTT法證實(shí)特異性體外殺傷率達(dá)到4834％(40：1)。6、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，用AFP—DC瘤

3、苗可以明顯減緩、抑制皮下移植瘤生長，甚至消失。AFPDC瘸苗回輸?shù)膶?shí)驗(yàn)組，五只小鼠(一只意外死亡)有四只存活，其中兩只小鼠的皮下移植瘤消失，一只瘤體縮小。空載體和空白對照組，各有一只小鼠的皮下移植瘤消失，其余小鼠的瘤體有不同程度的減小，但空載體組一只小鼠因瘤體增大而死亡?；A(chǔ)對照組的小鼠全部死亡。7、免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，AFPDC瘤苗不能完全抵御肝癌細(xì)胞的攻擊，五只小鼠中有三只皮下形成移植瘤，基礎(chǔ)對照組小鼠全部成瘤，空載體和空白對照組I各

4、有四只成瘤。但未成瘤的小鼠均可以抵御第二次腫瘤攻擊?！Y(jié)論：1、低劑量AFP脈沖DC，可以刺激DC的增殖，七調(diào)其B7分子表達(dá)和提高M(jìn)LR水平。2、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)基因可獲得有效表達(dá)，制備的AFPDC肝癌瘤苗能夠上調(diào)1L12表達(dá)，升高表面分子，刺激T細(xì)胞增殖并促進(jìn)其分泌IFNY。4、以AFP為靶點(diǎn)構(gòu)建的DC瘤苗，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性T細(xì)胞，回輸瘤苗可產(chǎn)生不同程度的抗肝癌治療和預(yù)防作用。rf創(chuàng)新點(diǎn)及意義：＼1根據(jù)DC生長發(fā)育過程中粘附性能不同的特點(diǎn)，