HB-EGF-EGFR通路調(diào)控腹膜通透性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、腹膜透析（腹透）是治療終末期腎衰竭的主要手段之一。長(zhǎng)期腹透后腹膜發(fā)生血管新生和通透性增加，導(dǎo)致腹膜超濾減少，是患者退出腹透的主要原因之一。然而，腹膜血管新生和通透性增加的機(jī)制目前尚不清楚。血管周細(xì)胞是微血管的重要組成部分，通過(guò)與內(nèi)皮細(xì)胞的密切聯(lián)系，共同調(diào)控血管的形成、穩(wěn)定、重塑及通透性。肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子（Heparin-binding epidermal growth factor，HB-EGF）通過(guò)與其表達(dá)在周細(xì)胞上的表皮生長(zhǎng)因子

2、受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)結(jié)合來(lái)募集周細(xì)胞，從而在血管新生中起重要作用。本研究通過(guò)構(gòu)建尿毒癥腹膜透析大鼠模型，觀察HB-EGF/EGFR在腹膜的表達(dá)，及其與腹膜周細(xì)胞分布、血管新生和腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能之間的關(guān)系，旨在探討腹膜血管新生機(jī)制，為防治腹膜血管新生，長(zhǎng)期保持腹膜功能尋找新的思路。
　　 本研究采用雄性Wistar大鼠32只，以5/6腎切除構(gòu)建尿毒癥大鼠模型，成模后行腹透植

3、管術(shù)，植管1周后開(kāi)始腹透。大鼠分為以下4組：對(duì)照組（n=8），行左右腎包膜剝除手術(shù)；尿毒癥非透析組（n=8），5/6腎切除尿毒癥大鼠；尿毒癥腹透組（n=8），給予4.25％葡萄糖腹透液3ml/100gBW進(jìn)行腹透，每日2次；CRM197組（n=8），給予含10ug/kg CRM197的4.25％葡萄糖腹透液進(jìn)行腹透，每日2次。4周后處死大鼠，各組大鼠處死前行腹膜平衡試驗(yàn)，測(cè)定腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和超濾功能。采集腹膜標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢測(cè)包括血管周細(xì)

4、胞分布情況、血管數(shù)量、間皮細(xì)胞脫落程度和間皮細(xì)胞完整程度，并采用免疫組化方法檢測(cè)腹膜組織HB-EGF及其受體EGFR的表達(dá)。
　　 透析4周后，與對(duì)照組及尿毒癥非透析組大鼠相比，尿毒癥腹透組大鼠腹膜HB-EGF、EGFR蛋白的表達(dá)明顯下降（p=0.002，p=0.011）。形態(tài)學(xué)檢查顯示尿毒癥腹透組大鼠腹膜血管計(jì)數(shù)較對(duì)照組及尿毒癥非透析組明顯增加（22.8±3.3 vs 2.6±1.1個(gè)/HP，p<0.001；22.8±3.3

5、vs 6.9±2.8個(gè)/HP，p<0.001）；周細(xì)胞血管覆蓋率下降。采用CRM197阻斷HB-EGF后腹膜血管計(jì)數(shù)（36.5±3.7vs 22.8±3.3個(gè)/HP，p<0.001）進(jìn)一步增加，血管周細(xì)胞減少更為明顯。平衡試驗(yàn)結(jié)果顯示尿毒癥腹透組大鼠腹膜D/Pcr較對(duì)照組及尿毒癥非透析組明顯增加（0.88±0.06 vs 0.70±0.11，p<0.001；0.88±0.06 vs0.79±0.08，p=0.035）；葡萄糖D/D0較對(duì)

6、照組及尿毒癥非透析組明顯下降（0.54±0.16 vs 0.85±0.08，p<0.001；0.54±0.16 vs0.69±0.06，p=0.006）；腹膜超濾量明顯減少（0.48±0.64 vs 4.58±1.64ml，p<0.001；0.48±0.64 vs2.29±0.50ml，p=0.018）。采用CRM197阻斷HB-EGF后腹膜D/Pcr進(jìn)一步增加（0.97±0.02vs 0.88±0.06，p=0.038）；葡萄糖D/D

7、0進(jìn)一步下降（0.33±0.08vs 0.54±0.16，p=0.007）；超濾量更為減少（-1.05±1.82 vs 0.48±0.64 ml，p=0.041）。腹膜HB-EGF、EGFR表達(dá)量與腹膜血管數(shù)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.828，p<0.001；r=-0.857，p<0.001）。
　　 綜上，我們成功建立了尿毒癥腹透大鼠模型。腹透引起尿毒癥大鼠腹膜周細(xì)胞分布減少，血管數(shù)量增加，超濾功能下降，同時(shí)下調(diào)尿毒癥大鼠腹膜HB-E