PDE5抑制劑對(duì)血腦腫瘤屏障通透性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的
　　建立小鼠淋巴瘤的原位腦腫瘤模型及血腦屏障(血腦腫瘤屏障)體外模型，研究PDE5抑制劑對(duì)腦部惡性腫瘤的化療療效影響，以及對(duì)血腦腫瘤屏障及正常血腦屏障通透性的影響，研究其分子機(jī)制，為提高腦部惡性腫瘤的化療療效提供新的方向和理論依據(jù)。
　　方法
　　體內(nèi)試驗(yàn)：
　　1、建立小鼠淋巴瘤的原位腦腫瘤模型
　　2、通過(guò)小鼠腦惡性腫瘤模型評(píng)估PDE5抑制劑對(duì)血腦腫瘤屏障的開(kāi)放作用(采用示蹤劑和檢測(cè)藥物濃度方法)

2、
　　1)采用示蹤劑Evan’s Blue，比較PDE5抑制劑使用后，是否增加腦腫瘤中的濃度。
　　2)采用氨甲喋呤藥物濃度檢測(cè)，比較PDE5抑制劑使用后，是否增加腦腫瘤中的濃度。
　　3、電鏡下小鼠血腦屏障中的超微結(jié)構(gòu)改變
　　體外實(shí)驗(yàn)
　　1、小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
　　2、Transwell系統(tǒng)共培養(yǎng)(腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞)的血腦屏障體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?br>　　3、熒光標(biāo)記的利妥昔單抗(

3、FITC-Rituximab)通透性實(shí)驗(yàn)
　　熒光分光光度計(jì)法測(cè)定BMECs細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的熒光標(biāo)記的利妥昔單抗(FITC-Rituximab)含量。
　　臨床標(biāo)本：
　　1、研究原發(fā)和轉(zhuǎn)移惡性腦腫瘤PDE5表達(dá)情況
　　1)免疫組化法檢測(cè)PDE5表達(dá)。
　　2)Western-Blot法檢測(cè)PDE5表達(dá)。
　　結(jié)果
　　1.免疫組化及病理顯示成功種植淋巴瘤，種植后小鼠體重變化情況及存活時(shí)間恒定有規(guī)

4、律，該方法建立的腦淋巴瘤動(dòng)物模型在組織病理學(xué)上接近人腦淋巴瘤，且顱內(nèi)生長(zhǎng)穩(wěn)定。成功率為80％。未見(jiàn)顱外轉(zhuǎn)移病灶，實(shí)驗(yàn)周期短，重復(fù)性較好。
　　2.依文思藍(lán)通透性檢測(cè)示：他達(dá)拉非組腦淋巴瘤血管通透性明顯增加(P<0.05)。氨甲喋呤在他達(dá)拉非組腦腫瘤組織中濃度增加近1.8倍(P<0.05)，而非用藥腫瘤組織和正常組織中藥物濃度無(wú)差異。電鏡觀(guān)察：他達(dá)拉非組小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)有大量微囊液泡。
　　3.原代星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP陽(yáng)

5、性，CD34陰性，原代小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞CD34弱陽(yáng)性，GFAP陰性。在腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)于熒光標(biāo)記利妥昔單抗的內(nèi)吞實(shí)驗(yàn)中，給予他達(dá)拉非后，共培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞熒光量未有差異(p>0.05)。單獨(dú)培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞給予他達(dá)拉非后，熒光分光光度法測(cè)得熒光量增加1.4倍(P<0.05)。
　　4.與正常腦組織標(biāo)本相比，PDE5在人腦惡性肘-瘤組織標(biāo)本中存在明顯高表達(dá)，并與腫瘤性質(zhì)相關(guān)，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。
　　結(jié)論

6、
　　1、外源性植入同源小鼠A20的B淋巴瘤，可在小鼠大腦中形成原位腫瘤，其形態(tài)及惡性程度符合腦淋巴瘤模型的要求，生長(zhǎng)特性及病理特征與人腦淋巴瘤相似，可作為臨床淋巴瘤基礎(chǔ)研究的理想模型。
　　2、5型磷酸二酯酶抑制劑可以特異性顯著增加小鼠腦淋巴瘤微血管的通透性，可能和微血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)微囊液泡數(shù)量增加有關(guān)。
　　3、他達(dá)拉非可增加腦腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)大分子藥物的通透性，同時(shí)不增加正常血腦屏障的通透性。
　　4、PD