重度創(chuàng)傷后NF-kB、IL-6-IL-10變化與MODS的關(guān)系及微量元素干預(yù)作用的研究.pdf

1、背景與目的:
　　多器官功能障礙綜合征(MODS)指在嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染和休克時(shí),同時(shí)或相繼出現(xiàn)兩個(gè)或兩個(gè)以上器官、系統(tǒng)急性功能障礙的臨床綜合征,為嚴(yán)重創(chuàng)傷后主要的致死性并發(fā)癥之一,其高發(fā)生率和高死亡率一直是醫(yī)學(xué)界的一大難題。因目前MODS死亡尚無病理形態(tài)學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn),所以亦是法醫(yī)病理學(xué)鑒定領(lǐng)域的一難題。Zn等TE在炎癥細(xì)胞激活,炎癥介質(zhì)代謝等炎癥反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展、調(diào)節(jié)過程中起重要作用。但是,目前創(chuàng)傷后TE急性缺乏與機(jī)體發(fā)生SIRS、M

2、ODS是否有關(guān),尚需進(jìn)一步研究。本研究在以往建立家兔重度創(chuàng)傷致MOF模型基礎(chǔ)上,通過適量TE干預(yù),觀察血清IL-6/IL-10,脾淋巴細(xì)胞核內(nèi)NF-kB P65及MODS發(fā)生率、死亡率等相關(guān)指標(biāo),探討創(chuàng)傷后TE變化與創(chuàng)傷后炎癥反應(yīng)平衡,MODS發(fā)生的相關(guān)性,以期為嚴(yán)重創(chuàng)傷治療提供新思路,為法醫(yī)學(xué)死因和死亡機(jī)理分析提供理論依據(jù)。
　　材料與方法:
　　健康雄性純種新西蘭大白兔70只,體重2~2.5kg,隨機(jī)分為:
　　①

3、重傷組37只;
　?、谘a(bǔ)充組28只;
　　③正常對(duì)照組5只,不損傷直接處死。
　　④死亡組12只,重傷組中傷后超過24h死亡的歸入死亡組。
　　所有創(chuàng)傷家兔模型均為ISS=27的肢體重度創(chuàng)傷模型。傷后1~5天,重傷組家兔予10％GS,補(bǔ)充組給予10%GS+安達(dá)美。各家兔均補(bǔ)液前采血,按傷前及傷后6h、1、3、6、9、14d時(shí)間點(diǎn)耳緣靜脈采血。存活家兔分別隨機(jī)于傷后1、3、6、9、14d頸動(dòng)脈放血處死,每時(shí)間點(diǎn)5只

4、。各重要臟器行HE染色,免疫組化及Western-blot方法檢測(cè)脾臟NF-kB P65,石墨爐原子發(fā)光法檢測(cè)血清及脾臟內(nèi)Zn、Cu、Se、Mn含量,同時(shí)用ELISA法測(cè)血清IL-6及IL-10濃度。
　　結(jié)果:
　　家兔創(chuàng)傷后24h內(nèi)表現(xiàn)為拒食,體重在1周內(nèi)進(jìn)行性下降10~20%,耳溫先下降后升高,耳緣血管先收縮貧血后擴(kuò)張淤血。心跳、呼吸頻率均加快達(dá)80~120次/分。重傷組家兔死亡率為37.5%,補(bǔ)充組死亡率13.04%

5、。解剖所見,存活家兔各臟器形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為不同程度的輕度淤血、腫脹,實(shí)質(zhì)細(xì)胞輕度水變性為主(顆粒性腫脹)。死亡家兔臟器淤血重,部分肺、肝表面可見散在細(xì)小灰白色感染灶;重要臟器實(shí)質(zhì)細(xì)胞高度水變性,彌漫炎性細(xì)胞浸潤(rùn);胸腺皮質(zhì)明顯變薄,髓質(zhì)擴(kuò)大,胸腺小體增多。脾竇萎陷貧血、淋巴組織萎縮,多見大小形態(tài)不一的退變細(xì)胞和凋亡小體。
　　各創(chuàng)傷家兔血清AST、ALT、Cr、BUN變化趨勢(shì)較一致,均表現(xiàn)為傷后迅速升高,24h達(dá)高峰,然后逐漸恢復(fù)正常水

6、平。重傷組生化指標(biāo)升高持續(xù)時(shí)間較補(bǔ)充組明顯延長(zhǎng),3d后仍未下降。死亡組家兔在死前時(shí)間點(diǎn)所測(cè)指標(biāo),6只肝腎指標(biāo)均達(dá)衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn),另6只腎功能指標(biāo)達(dá)衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　各創(chuàng)傷家兔血清Zn、Cu、Se、Mn變化趨勢(shì)基本一致,先下降后升高,其后再次下降,然后逐漸恢復(fù)正常,呈波浪式變化。傷后補(bǔ)充組Zn、Se、Mn平均濃度高于對(duì)照和死亡組,但仍低于傷前濃度,補(bǔ)充組波動(dòng)范圍也小于重傷組。對(duì)照和補(bǔ)充組間Cu濃度無明顯區(qū)別,6-9d死亡的家兔血清C

7、u降低明顯。脾TE變化規(guī)律與血清中基本相似,呈波浪式變化趨勢(shì),補(bǔ)充組TE含量較重傷組高。
　　創(chuàng)傷6h左右,各創(chuàng)傷家兔外周血WBC濃度有所下降,然后快速升高。傷后3-6d達(dá)到高峰值后下降,但死亡組繼續(xù)維持在高水平。傷后6h,PMN構(gòu)成比即明顯增高,傷后第9d后開始下降,死亡組則持續(xù)高水平。傷后血清IL-6、IL-10均波浪式變化,但I(xiàn)L-10波動(dòng)較小。補(bǔ)充組IL-6平均值低于重傷組和死亡組,且波動(dòng)范圍小,重傷組和死亡組波動(dòng)范圍較大

8、。創(chuàng)傷后,脾細(xì)胞核內(nèi)NF-kB P65表達(dá)量增高,傷后6d達(dá)高峰值,然后開始下降,傷后9d達(dá)低谷后又開始增高。三組比較,補(bǔ)充組平均值最低,波動(dòng)范圍最小。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),血清IL-6濃度與脾Zn含量呈負(fù)相關(guān),與脾細(xì)胞核內(nèi)P65量亦表現(xiàn)出負(fù)相關(guān)。脾細(xì)胞核內(nèi)P65表達(dá)量與脾Zn含量呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1、建立了ISS=27的家兔肢體重度創(chuàng)傷模型,通過適當(dāng)補(bǔ)充復(fù)合TE制劑,進(jìn)一步證實(shí)了嚴(yán)重創(chuàng)傷后急性TE缺乏與MOF和死亡高發(fā)

9、生率相關(guān)。
　　2、本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)重度創(chuàng)傷后器官功能狀態(tài)及形態(tài)學(xué)相結(jié)合動(dòng)態(tài)過程的觀察,以及前期工作基礎(chǔ)上,進(jìn)一步證實(shí)了多臟器彌漫性炎細(xì)胞浸潤(rùn),實(shí)質(zhì)細(xì)胞高度水變性,局灶性壞死及胸腺和脾淋巴器官萎縮等應(yīng)是MODS死亡的病理學(xué)基礎(chǔ),為法醫(yī)病理學(xué)鑒定MOF死亡提供了參考依據(jù)。
　　3、本實(shí)驗(yàn)提示,重度創(chuàng)傷后的TE急性缺乏損害機(jī)體免疫應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)能力,參與了創(chuàng)傷后SIRS、MODS的發(fā)生、發(fā)展。
　　4、本實(shí)驗(yàn)提示,重度創(chuàng)傷后早