蛻皮甾酮對大鼠腦缺血后血管生成及神經功能恢復的影響.pdf

1、缺血性腦血管病的發(fā)病率及致殘率均較高，嚴重危害人類健康。尋找對腦梗塞有療效的藥物，降低腦血管病的死亡率和致殘率，是目前國內外學者共同關心的課題。研究發(fā)現(xiàn)，血管生成能促進損傷神經功能恢復，與缺血性腦血管病的預后密切相關。治療性血管生成(Therapeuticangiogenesis，TAG)，即通過藥物、基因、干細胞或其他方法促使缺血組織在原有微血管基礎上形成新的毛細血管，并與原有的血管網(wǎng)相交匯以改善循環(huán)，這一方法的出現(xiàn)為缺血性腦血管病的

2、治療提供了很有希望的新途徑。血管內皮生長因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是目前公認促血管生成作用活性最強且必需的生長因子，許多科學家正致力于尋找一種提高內源性VEGF合成及分泌的藥物或方法來治療缺血性腦血管病。 蛻皮甾酮(ecdysterone，EDS)是一種昆蟲蛻皮活性的天然甾體化合物。大量研究表明，蛻皮甾酮具有抗氧化作用；能促進內皮細胞增殖，保護內皮細胞抵抗各種致傷因素的損傷，

3、有效抑制缺氧導致的內皮細胞凋亡；促進心肌細胞和靜脈內皮細胞VEGF的表達及神經保護等多種藥理作用。蛻皮甾酮在循環(huán)系統(tǒng)及中樞神經系統(tǒng)的潛在應用前景使我們推想：蛻皮甾酮可能對缺血性腦損傷有潛在的治療價值?相關研究尚未見國內外報道。EDS在動植物界廣泛存在，我國是世界上第一個工業(yè)化大批量生產EDS的國家，相對于重組的VEGF蛋白或基因治療來說，易于獲取，成本低廉，對其醫(yī)用價值的研究有助于獲得盡早真正用于臨床的適合我國醫(yī)療現(xiàn)狀的治療手段。

4、 本課題將蛻皮甾酮應用于腦缺血大鼠，研究其對腦缺血損傷后神經功能恢復及血管生成、星形膠質細胞活化的影響，初步探討其促血管生成作用的可能機制以及改善神經功能恢復的可能途徑，豐富腦缺血后治療性血管生成的內容，為進一步將其開發(fā)成為具有臨床應用價值的缺血性腦血管病治療藥物提供一定的理論和實驗依據(jù)。 方法： 1.采用大腦中動脈線栓法建立大鼠局灶性腦缺血模型。 2.模型制備成功后，將動物隨機分為藥物干預組和缺血對照組，分別

5、腹腔注射蛻皮甾酮或等量溶劑，飼養(yǎng)至2天、7天、14天、21天處死。 3.觀察缺血后早期血清MDA含量、腦組織含水量、梗塞體積、死亡率。 4.通過免疫組織化學染色了解微血管密度、VEGF蛋白表達及星形膠質細胞活化的情況，結合激光多普勒測定局部腦血流量，對血管生成及其作用機制進行了初步的探討。 5.采用神經功能評分、SEP、MEP等檢測指標了解蛻皮甾酮對缺血后損傷神經功能恢復的影響。 結果： 1.成功

6、建立了大鼠大腦中動脈供血區(qū)缺血梗死模型。 2.蛻皮甾酮干預組血清MDA含量、腦組織含水量、梗死體積百分比、死亡率均明顯低于單純缺血組。 3.免疫組化觀察腦缺血后VEGF蛋白表達在7天時最高，14天時已開始減少，21天時消失；主要分布于神經元。干預組VEGF蛋白表達變化趨勢和缺血對照組一致，在7天和14天時表達均高于缺血對照組，7天時差異有顯著性。 4.FⅧ標記的微血管密度測定：大鼠腦缺血后周邊區(qū)微血管密度增高，7

7、天時最高，21天時略有下降。干預組在14天時最高，持續(xù)至21天仍在較高的水平；各觀察時相點均較對照組明顯增高，差異有顯著性。 5.局部腦血流量測定：缺血后14天測定缺血皮層rCBF，蛻皮甾酮干預組明顯高于缺血對照組，差異有顯著性。 6.GFAP免疫組化染色觀察星形膠質細胞：大鼠腦缺血后GFAP陽性細胞數(shù)開始增多，染色加深，突起稍增粗和增多，呈活化的星形膠質細胞形態(tài)。蛻皮甾酮干預組在各時相點GFAP陽性細胞數(shù)較單純缺血組增

8、加更明顯，染色加深，突起更多更長；GFAP免疫組化灰度值顯著低于缺血對照組，陽性細胞面積顯著高于缺血對照組。GFAP陽性細胞面積與MVD呈正相關。 7.NSS量表、SEP、MEP檢查結果，MCAo術后大鼠神經功能明顯受損，自身有一定程度的恢復。蛻皮甾酮干預大鼠，各項檢查指標恢復更快，更明顯，但仍未完全恢復到正常水平。 結論： 1.蛻皮甾酮通過減輕氧自由基損傷，減輕腦水腫，減少了梗死體積及死亡率，對損傷的神經細胞有

9、保護作用，延長了血運重建的治療時間窗。提示其在血管生成療法治療缺血性腦血管病的應用中，具有較單純血管生成促進劑更優(yōu)越的應用前景. 2.蛻皮甾酮具有確切的促進大鼠腦缺血周邊血管生成，增加局部腦血流量的作用；促進VEGF的表達可能是其作用機制之一； 3.蛻皮甾酮干預促進了腦缺血后星形膠質細胞活化，可能與其促血管生成作用有關。 4.蛻皮甾酮具有多種藥理活性，參與腦缺血后各階段，促進了大鼠腦缺血后較長時期的神經功能恢復，