抗菌藥物選擇壓力下的布魯氏菌突變特征的研究.pdf

1、近年在我國(guó)部分地區(qū)布魯氏病的發(fā)生率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì),目前針對(duì)布魯氏菌感染患者普遍采用抗生素來治療。由于一些用藥策略的不合理現(xiàn)象導(dǎo)致布魯氏菌對(duì)抗菌素的耐藥率越來越高。怎樣降低布魯氏菌對(duì)藥物的耐藥率,延長(zhǎng)藥物使用壽命,及時(shí)治愈急性期病人,防止轉(zhuǎn)為慢性病人,是亟待解決的重要課題。近年來在大量研究基礎(chǔ)上,有人提出了防耐藥突變濃度MPC(Mutantpreventionconcentration)假說與突變選擇窗MSW(Mutationselec

2、tionwindow)理論,為控制感染、降低耐藥突變株的選擇性富集提供了新的思路。本研究測(cè)定利福霉素與頭孢菌素等4種藥物對(duì)布魯氏菌S2株的最低抑菌濃度MIC(Minimalinhibitoryconcentration)和MPC,并結(jié)合PCR、DNA測(cè)序等現(xiàn)代分子生物學(xué)方法檢測(cè)耐藥突變株的相關(guān)目的基因,從而闡明耐藥菌株的突變特征。這將為遏制布魯氏菌耐藥性的發(fā)生發(fā)展,優(yōu)化抗菌藥物的合理應(yīng)用等提供有利的數(shù)據(jù)依據(jù)。
　　試驗(yàn)中通過肉湯稀

3、釋法與瓊脂稀釋法分別測(cè)定了4種抗生素類藥物(利福平、利福布丁、頭孢地尼、頭孢吡肟)對(duì)布魯氏菌S2株的MIC和MPC。測(cè)定結(jié)果顯示同類藥物中利福平和利福布丁對(duì)布魯氏菌S2株的MSW范圍分別為4~460μg/mL和0.703~512μg/mL,SI分別是115和728。而頭孢地尼對(duì)布魯氏菌S2株的MSW范圍為0.2361~0.5764,SI是2.44;頭孢吡肟的MIC、MBC值分別為0.0083μg/mL、0.2951μg/mL。通過對(duì)比S

4、I值來看,頭孢地尼<利福平<利福布丁。比較不同藥物的菌落恢復(fù)生長(zhǎng)比率曲線可看出頭孢地尼的平臺(tái)區(qū)最短,而利福平和利福布丁的平臺(tái)區(qū)比較長(zhǎng);同類藥物的比較中利福布丁的平臺(tái)區(qū)要比利福平長(zhǎng),而頭孢吡肟的實(shí)驗(yàn)中沒有觀察到任何恢復(fù)生長(zhǎng)的菌落,因此無法繪制出生長(zhǎng)比率曲線。就此得出結(jié)論:三四代頭孢與利福霉素聯(lián)合使用可以有效抑制布魯氏菌的同時(shí)防止其耐藥的出現(xiàn)。
　　研究中選取了不同藥物濃度下生長(zhǎng)的菌落并提取DNA后采用PCR擴(kuò)增目的基因片段進(jìn)行測(cè)序。

5、經(jīng)序列比對(duì)分析后發(fā)現(xiàn)利福平與利福布丁篩選出的突變株中均存在H536Y、S532L、H536R、R539H氨基酸位點(diǎn)的突變。另外在利福平耐藥株中還發(fā)現(xiàn)存在Q523L突變體;利福布丁耐藥株中還存在521~523LSQ(1561~1569位堿基)缺失、Q523K、S541L位點(diǎn)的突變,低濃度下還有極少數(shù)菌株被檢出rpoB基因沒有突變。最后從rpoB的突變特征推測(cè)H536Y突變體可能是導(dǎo)致利福霉素耐藥的穩(wěn)定突變體。在頭孢菌素耐藥株的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)p

6、enA基因突變的發(fā)生集中在第385~560位氨基酸序列范圍內(nèi)。其中以N477S、S484L、A559D位點(diǎn)突變最為常見,其次還發(fā)現(xiàn)F519I、L387F、A559T、G485V、T499S位點(diǎn)突變。隨著濃度的增加最終突變體以G485V、T499S位點(diǎn)突變?yōu)橹?在mrcA基因PCR產(chǎn)物的測(cè)序結(jié)果中沒有發(fā)現(xiàn)任何突變。這再一次證實(shí)了細(xì)菌對(duì)頭孢菌素敏感性降低或耐藥是penA基因突變所導(dǎo)致的觀點(diǎn)。
　　上述研究依次表明藥物的結(jié)構(gòu)與濃度可以影