角化棘皮瘤與人乳頭瘤病毒相關(guān)性研究.pdf

1、背景：角化棘皮瘤(Keratoacanthoma，KA)是一種較特殊、相對少見的皮膚腫瘤，通常生長迅速、組織學(xué)表現(xiàn)?？崴品只己玫钠つw鱗狀細(xì)胞癌(squamouscellcarcinoma，SCC)，而臨床上又有自行消退的良性生物學(xué)行為。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為它是一種良性腫瘤，亦有學(xué)者認(rèn)為它是皮膚SCC的一種特殊亞型。幾種主要的亞型包括單發(fā)型、多發(fā)型、泛發(fā)發(fā)疹型和邊緣離心型。單發(fā)型最常見，由Hutchinson于1889年首次描述。 KA

2、的病因和發(fā)病機(jī)制目前不清。有關(guān)致病因素包括紫外線照射、人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染、物理化學(xué)因素致?lián)p傷、化學(xué)致瘤物、免疫機(jī)能受抑制等。認(rèn)為與HPV感染有關(guān)的證據(jù)包括：可在提供和接受人皮膚植皮處手術(shù)切口周圍發(fā)生多發(fā)性損害；有的損害還見于上下唇的對應(yīng)處；有人曾發(fā)現(xiàn)過核內(nèi)病毒樣包涵體，雖對動物和人的實驗性接種未成功，但在雞胚絨毛尿囊膜和某些組織培養(yǎng)內(nèi)似有生長。KA的典型特點是生長迅速且在數(shù)月內(nèi)自行消退，這

3、種良性的生物學(xué)行為也提示其病毒學(xué)病因。 關(guān)于KA與HPV關(guān)系的研究報告最初見于上世紀(jì)80年代，Pfister等首先于2例KA中檢測到HPVDNA；1986年Gassenmaier等首次應(yīng)用生物素標(biāo)記HPV25的DNA探針在嚴(yán)格條件下原位雜交檢測32例單發(fā)型KA石蠟切片組織，陽性率為37.5％(12/32)。隨后，國外陸續(xù)開展了應(yīng)用PCR、Southernblot和原位雜交等不同方法對KA中HPVDNA進(jìn)行檢測，報告了不同的檢出率

4、，并檢出與生殖器相關(guān)亞型6、16、18、35、58、61以及與皮膚相關(guān)亞型1、2、5、9、10、14、19、20、21、25、37、38、49、80。亦有陰性結(jié)果報告。各種PCR和Southernblot方法都需要破壞組織來提取DNA，從而失去了原位觀察病變并進(jìn)行組織病理學(xué)分析的良好機(jī)會，也就難以得到某些對于研究非常重要的資料。 原位雜交屬于分子雜交的一種，最大優(yōu)點是可以同時進(jìn)行雜交信號部位的組織形態(tài)學(xué)分析，它使生命科學(xué)的研究從

5、器官、組織和細(xì)胞水平走向分子水平，為各個學(xué)科的研究帶來突破性的進(jìn)展。應(yīng)用原位雜交技術(shù)，Euvrard等報告66％(8/12)KA檢出HPVDNA，檢出HPV1、2、5、16、18型；Magee等報告被檢的所有8例KA均有HPV16DNA表達(dá)；但英國Miller等應(yīng)用一致性生物素標(biāo)記探針的原位雜交方法分析口面部損害中的HPV時，6例KA均未檢出。 鑒于以上有著較大差別的檢測結(jié)果，至今關(guān)于KA與HPV的關(guān)系尚存有爭議。而且對于HPV

6、DNA陽性的病例，也未見描述HPVDNA陽性細(xì)胞分布特征的報告。近年國內(nèi)學(xué)者對KA的研究多為其病例報告、治療個案及從病理診斷和鑒別診斷的角度進(jìn)行組織病理學(xué)分析；分子生物學(xué)方面的研究主要著眼于癌基因與抑癌基因的表達(dá)和突變的檢測，從細(xì)胞凋亡和細(xì)胞分化、增殖角度尋求KA與SCC的鑒別標(biāo)志。尚未見對KA與HPV的關(guān)系進(jìn)行研究和探討的報告。故該研究旨在應(yīng)用原位雜交技術(shù)，通過觀察國內(nèi)KA患者皮損中HPVDNA的表達(dá)情況，從分子病理學(xué)角度探討KA與H

7、PV感染的相關(guān)性，為KA的病因與發(fā)病機(jī)制方面的研究提供相關(guān)線索。 目的：(1)檢測KA組織中的HPVDNA陽性率；(2)觀察石蠟切片組織中HPVDNA陽性細(xì)胞的分布特征；(3)探討KA與HPV的關(guān)系，評價HPV感染在KA發(fā)病中的作用。 材料和方法：(1)應(yīng)用地高辛標(biāo)記DNA探針(可檢測HPV6、11、16、18、31、33)原位雜交試劑盒，檢測26例KA(25例單發(fā)型KA、1例多發(fā)型KA，共48個蠟塊組織)和26例正常對

8、照者石蠟切片組織標(biāo)本中HPVDNA；(2)通過HE染色，觀察對照分析HPVDNA陽性分布有無特征性；(3)應(yīng)用SPSS10.0軟件對病例組HPVDNA陽性患者和陰性患者一般情況以及病例組和正常對照組的HPVDNA陽性表達(dá)率進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，P＜0.05時有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果：(1)25例單發(fā)型KA中有10例檢測到HPVDNA，1例多發(fā)型KA檢測結(jié)果為陰性，HPVDNA陽性率為38.46％(10/26)；正常對照組未檢測到HPVDN

9、A，陽性率為0％；(2)HE染色示陽性表達(dá)組織中9例為成熟期皮損，1例處于消退期；HPVDNA陽性細(xì)胞多數(shù)位于火山口樣凹陷表皮下方增生的棘細(xì)胞層和唇部，呈灶狀、片狀聚集或散在分布；(3)病例組HPVDNA陽性與陰性患者在性別、發(fā)病年齡、病期以及腫瘤大小方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義，實驗組與正常對照組HPVDNA陽性率經(jīng)x2檢驗有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論：該實驗應(yīng)用地高辛標(biāo)記的HPVDNA探針(可檢測HPV6、11、16、18、