血管內(nèi)皮生長因子足細(xì)胞特異性下調(diào)與生理病理發(fā)育.pdf

1、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一種有效的血管形成和血管通透性誘導(dǎo)因子,特異性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞,具有維持血管正常狀態(tài)和完整性、增加血管通透性、促進(jìn)血管生成的作用。在正常成人和動(dòng)物組織中表達(dá)水平較低,一些代謝旺盛、血供豐富的組織中VEGF表達(dá)水平略高,一些病理情況下可以過度表達(dá)。
　　 腎臟的主要功能是維持體液平衡,該過程中有兩百萬個(gè)腎小球參與血液濾過。在胚胎

2、和成年腎臟中VEGF主要表達(dá)于腎小球基質(zhì)和球內(nèi)細(xì)胞。在腎小管VEGF主要表達(dá)與遠(yuǎn)端小管和集合管上皮。VEGF作為重要的血管生成調(diào)節(jié)因子在生理和病理?xiàng)l件下都發(fā)揮著重要作用。過高或過低的表達(dá)都會(huì)引起腎臟生理功能的障礙。VEGF在胚胎發(fā)育時(shí)期的功能和調(diào)節(jié)機(jī)制已被廣泛研究。VEGF單基因缺失就可以引起胚胎致死,因此對于VEGF在成年體內(nèi)的研究很難進(jìn)行。近年來通過基因打靶技術(shù),成功實(shí)現(xiàn)了VEGF在成年體內(nèi)的敲除,并由此引起了腎臟生理功能的紊亂,表

3、現(xiàn)為血栓性的微血管病。然而,對于VEGF在成年體內(nèi)的研究依然非常有限。隨著抗VEGF治療在人體病理?xiàng)l件下的廣泛應(yīng)用,這一療法顯示出了越來越多的并發(fā)癥。越來越多的人們開始意識到了VEGF在成年體內(nèi)的重要性,關(guān)于更多的VEGF在成年體內(nèi)的信息有待人們?nèi)パ芯俊?br>　　 為了獲得更多的VEGF在成年體內(nèi)的信息,也為了更好的模擬臨床的抗VEGF治療條件,理想的方法就是引入一種可調(diào)控可誘導(dǎo)的基因調(diào)節(jié)系統(tǒng),利用該系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)VEGF基因在特定時(shí)間特

4、定細(xì)胞的部分性下調(diào)。在本研究中我們引進(jìn)了Tet-On基因調(diào)節(jié)系統(tǒng),利用加減四環(huán)素(doxycycline,Dox)來實(shí)現(xiàn)對足細(xì)胞VEGF基因的表達(dá)調(diào)節(jié)。通過在VEGF基因啟動(dòng)子區(qū)插入四環(huán)素操縱子序列(tet operator sequence,tetO),成功構(gòu)建了可調(diào)控VEGF基因表達(dá)的轉(zhuǎn)基因鼠模型(VEGFtetO)。同時(shí),我們建立了在足細(xì)胞特異性啟動(dòng)子引導(dǎo)下表達(dá)四環(huán)素阻遏蛋白(tetR-Krab)的轉(zhuǎn)基因鼠模型Nephrin-te

5、tR-Krab(tg／+)。利用加減四環(huán)素可以實(shí)現(xiàn)四環(huán)素阻遏蛋白與四環(huán)素操縱子的可逆結(jié)合。通過將上述兩種轉(zhuǎn)基因鼠雜交,在得到的雙轉(zhuǎn)基因鼠VEGF(tetO／tetO)／Nephrin-tetR-Krab(tg／+)中成功實(shí)現(xiàn)了對足細(xì)胞VEGF的表達(dá)下調(diào),且該下調(diào)導(dǎo)致了很多腎臟方面的并發(fā)癥。該研究通過不完全抑制或部分性降低VEGF表達(dá),很好的模擬了臨床的抗VEGF治療條件,將為臨床診斷和治療提供可靠的依據(jù)。
　　 本研究的目的是探