陣列文庫及陣列文庫消減雜交用于肝癌相關(guān)基因篩選、表達(dá)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控的初步研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文陣列文庫及陣列文庫消減雜交用于肝癌相關(guān)基因篩選、表達(dá)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控的初步研究姓名：滿曉波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王紅陽;吳孟超2002.5.1博} ．學(xué)位論文 陣列文庫及眸列文庫消減雜交用于 中業(yè)摘要笪壅塑羞蕉圈塹壟：垂姿塑壁墨塑塑墮墊生墮耋——————————一中文摘要陣列文庫及陣列文庫消減雜交用于肝癌相關(guān)基因篩選、表達(dá)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控的初步研究指導(dǎo)老師：王紅陽教授研究生：滿曉波 專業(yè)：分子

2、生物學(xué)學(xué)習(xí)單位：第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院原發(fā)性肝癌的研究在我國基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)研究中占有重要的地位，肝癌相關(guān)基因的克隆、鑒定、表達(dá)檢測(cè)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控對(duì)于從基因水平認(rèn)識(shí)肝細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、再生和惡變的分子機(jī)理、闡明其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程和途徑，不僅具有重要的研究意義，而且對(duì)于肝癌的早期基因診斷和治療具有重大的臨床應(yīng)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)利用價(jià)值。本文建立了基于D N A 陣列的陣列文庫消減雜交技術(shù)( A r r a y e dL i b r a r yS u

3、 b t r a c t i o n H y b r i d i z a t i o n ，A L S H ) 。以此技術(shù)結(jié)合基因芯片技術(shù)用于c D N A 文庫的大規(guī)模高效基因篩選，將之應(yīng)用于肝臟c D N A 文庫的小規(guī)模的驗(yàn)證性研究得到了相當(dāng)數(shù)量的已知基因、已知E S T 和一個(gè)新基因克隆：結(jié)合肝癌表達(dá)譜檢測(cè)進(jìn)行了肝癌相關(guān)基因的差異表達(dá)研究。陣列文庫消減雜交結(jié)合體內(nèi)染色質(zhì)免疫沉淀可以進(jìn)行全基因組尺度內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控序列檢測(cè)，我們進(jìn)

4、行了較小規(guī)模的驗(yàn)證確定了這一平臺(tái)的有效性和實(shí)用性，進(jìn)行了肝癌細(xì)胞經(jīng)絲裂霉素處理后核轉(zhuǎn)錄因子N F r d 3 的表達(dá)和結(jié)合位點(diǎn)檢測(cè)，獲得N F r ．B 在此狀態(tài)下的結(jié)合位點(diǎn)序列克隆的陣列文庫，得到一些新的受N F v ．B 調(diào)控的下游基因的啟動(dòng)子結(jié)合序列。／ ／第一部分陣列文庫及陣列文庫消減雜交用于肝癌相關(guān)基因篩選和差異表《、 達(dá)的研究利用平均插入子大小1 ．6 0 k b 的真核表達(dá)載體p c D N A 3 ．1 正常肝臟質(zhì)粒文庫