人羊膜細(xì)胞具有向心肌樣細(xì)胞分化的特性.pdf

1、目的：心肌成形術(shù)(CCM)為治療因心肌細(xì)胞受損而導(dǎo)致的心臟功能衰退提供了理想的途徑。人羊膜細(xì)胞可能成為CCM的細(xì)胞來源。然而，人羊膜細(xì)胞中的上皮細(xì)胞(hAECs)和間充質(zhì)細(xì)胞(hAMCs)向心肌細(xì)胞的分化潛能及其體外誘導(dǎo)的影響因素均尚待進(jìn)一步探討。本研究試圖通過體外誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)，以評(píng)價(jià)hAECs和hAMCs向心肌細(xì)胞分化的能力，為人羊膜細(xì)胞作為CCM的細(xì)胞來源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：①采用胰蛋白酶一膠原酶分離法分離hAECs和hA

2、MCs，用流式細(xì)胞儀(FCM)進(jìn)行表型鑒定。②hAECs和hAMCs均用10μmol/L 5-氮雜胞苷(5-aza)誘導(dǎo)24h，隨后hAECs用含抗壞血酸磷酸鹽和5％胎牛血清的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；而hAMCs用含堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)和5％胎牛血清的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。③分別取誘導(dǎo)后第12d的hAECs和誘導(dǎo)后第8d的hAMCs，采用RT-PCR檢測(cè)心肌特異性轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5和GATA-4 mRNA的表達(dá)。④取誘導(dǎo)后2周、4周的

3、hAECs和hAMCs，用免疫熒光染色法檢測(cè)肌細(xì)胞特異蛋白α-輔肌動(dòng)蛋白和結(jié)蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：①通過胰蛋白酶和膠原酶消化可分離較高豐度的人羊膜細(xì)胞，每份羊膜可獲得5.01×10<'7>hAECs和6.30×10<'7>hAMCs；FCM分析顯示hAECs幾乎不表達(dá)CD44，而hAMCs中有26.6％表達(dá)CD44。②hAECs經(jīng)5-aza和抗壞血酸誘導(dǎo)后，表達(dá)肌系細(xì)胞標(biāo)志結(jié)蛋白和α-輔肌動(dòng)蛋白，有心肌特異性轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5和