COX-2與大鼠重癥急性胰腺炎所致肝損傷的病理學(xué)研究.pdf

1、[背景]在急性胰腺炎(Acute pancreatitis，AP)中，約15％-20％的病人病情兇險(xiǎn)，病程進(jìn)展成為重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)，病人的癥狀及體征嚴(yán)重，并發(fā)癥多，病死率高，早期可伴有多器官功能的損害。肝臟是SAP時(shí)多器官功能受損最早的胰外器官，當(dāng)發(fā)展至多器官功能衰竭(Mutiple organ failure，MOF)時(shí)，死亡率可高達(dá)50％。SAP所致多器官功能損害的發(fā)生機(jī)理

2、目前仍不十分清楚，是該病療效不理想，死亡率高的根本原因。SAP合并肝損害在臨床上比較常見且肝損害發(fā)生的早而迅速，肝臟在功能及病理形態(tài)學(xué)上有明顯的變化。SAP合并肝損害的機(jī)制并不十分清楚，研究表明主要與以下因素有關(guān)：胰腺釋放的破壞因子的作用；細(xì)胞因子及炎性介質(zhì)的作用，其中TNF-α起著核心的作用；解剖學(xué)因素的影響。多種炎性介質(zhì)及細(xì)胞因子參與了肝損傷的過程，其中前列腺素是一種重要的炎癥介質(zhì)，在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮了重要的作用。在炎癥的候選始動(dòng)

3、因子中，環(huán)氧合酶-2(COX-2)是炎癥中催化前列腺素合成的一種關(guān)鍵誘導(dǎo)酶，可致肝臟受損，引起一系列的病理形態(tài)學(xué)改變及肝細(xì)胞凋亡。肝臟受損時(shí)，激素、細(xì)胞因子、內(nèi)毒素等誘導(dǎo)COX-2的表達(dá)，氧化應(yīng)激與脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物也可誘導(dǎo)COX-2表達(dá)，參與肝損傷。目前對(duì)于COX-2在SAP肝損傷中對(duì)肝臟代謝的影響、在肝臟組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)中的作用的研究已取得一定進(jìn)展。而且，各種致病因素造成肝臟損害時(shí)，細(xì)胞因子、細(xì)菌內(nèi)毒素及氧化應(yīng)激與脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)

4、物可誘導(dǎo)COX表達(dá)及PGs合成，參與肝臟的進(jìn)一步損傷。進(jìn)一步說明SAP所致肝損傷時(shí)的炎癥反應(yīng)均與COX-2有密切的關(guān)系。雖然SAP并發(fā)MOF時(shí)，肝功能衰竭的發(fā)生率明顯少于肺功能衰竭及腎功能衰竭，但肝臟卻是SAP時(shí)功能受損最早的胰外器官。此外，由于其具有復(fù)雜的生理功能以維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，肝臟在SAP病情發(fā)展中具有十分特殊的作用。目前發(fā)現(xiàn)COX-2在SAP發(fā)生時(shí)肝臟組織中呈高表達(dá)，并在肝臟損害中起重要的作用。因此，研究sAP并發(fā)肝臟損害的

5、機(jī)制及COX-2的作用，對(duì)于防治肝臟損害，進(jìn)而防止MOF的發(fā)生具有重要意義。 [目的]通過建立大鼠SAP感染模型，觀察SAP肝損傷時(shí)的病理組織學(xué)變化和肝臟COX-2蛋白表達(dá)情況，探討COX-2在大鼠SAP肝損傷中的作用，以期對(duì)臨床SAP肝損傷的治療提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 [方法]健康雄性wistar大鼠80只，隨機(jī)分2組：sham組(n=40)僅行胰膽管插管：NaTc組(n=40)行膽胰管逆行注射3.5％?；悄懰徕c，分別于

6、術(shù)后4、8、16、24小時(shí)處死動(dòng)物。觀察動(dòng)物全身情況及死亡率，胰腺濕／干比，血清淀粉酶、腹水淀粉酶及血清ALT、AST變化；肝臟、胰腺的大體及鏡下病理變化；應(yīng)用免疫組化SABC法檢測(cè)各組大鼠肝組織中COX-2的表達(dá)。 [結(jié)果]①成功建立大鼠SAP模型：NaTc組動(dòng)物死亡率顯著增高，肝臟、胰腺、損傷加重，胰腺濕／干比增加，血清淀粉酶、腹水淀粉酶及血清ALT、AST明顯升高；血清TNF-α含量升高。 ②肝臟病理組織學(xué)的改變：注射N

7、a-Tc后4h，肝組織有明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，可見肝細(xì)胞發(fā)生氣球樣變性，肝細(xì)胞界限不清，肝細(xì)胞胞漿呈顆粒狀；術(shù)后8h匯管區(qū)內(nèi)可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，小葉周邊的肝細(xì)胞發(fā)生嗜酸性變性，并可見凋亡小體；術(shù)后16h可見小葉中央發(fā)生部分片狀的出血壞死，周邊發(fā)生灶性壞死，部分肝細(xì)胞核消失，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，部分肝細(xì)胞核固縮，同時(shí)可見多處灶性出血壞死區(qū)，肝索變窄，雙核肝細(xì)胞增多，匯管區(qū)內(nèi)炎性細(xì)胞明顯浸潤(rùn)，并見匯管區(qū)內(nèi)血管白細(xì)胞附壁，小靜脈內(nèi)白色血栓形成；肝細(xì)胞發(fā)

8、生橋接壞死；術(shù)后24h可見小葉中央發(fā)生大片的出血壞死，肝細(xì)胞核濃縮，可見較多的凋亡小體，肝索變窄，肝竇擴(kuò)張更加明顯，匯管區(qū)水腫，較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)，脈管擴(kuò)張、充血。③電鏡觀察：對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，實(shí)驗(yàn)大鼠胰膽管內(nèi)注射Na-Tc4h大部分肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，少數(shù)肝細(xì)胞可見線粒體擴(kuò)張，個(gè)別細(xì)胞處于凋亡的最初階段，表現(xiàn)為染色質(zhì)的邊集和胞漿濃縮；8h后可見部分血竇擴(kuò)張，內(nèi)皮細(xì)胞脫落，表面附著有聚集成堆腫脹變性的血小板，形成微血栓，16h后

9、在竇周隙內(nèi)可見細(xì)胞碎片及凋亡小體；24小時(shí)后可見肝竇內(nèi)巨噬細(xì)胞吞噬凋亡小體和細(xì)胞碎片，并可見核固縮。④肝組織中的COX-2表達(dá)：正常大鼠肝組織內(nèi)COX-2蛋白呈低水平表達(dá)，造模后，大鼠肝組織內(nèi)COX-2蛋白表達(dá)明顯增加，至24小時(shí)達(dá)最高水平：大鼠肝組織內(nèi)COX-2蛋白表達(dá)與胰腺炎病變程度及肝損傷程度成正相關(guān)。 [結(jié)論]可通過使用牛磺膽酸鈉膽胰管逆行注射法建立大鼠SAP模型，SAP時(shí)大鼠的肝臟功能在病理生理學(xué)方面發(fā)生損傷性變化，肝