AIB1蛋白CID結構域特異性DNA適配子的篩選及應用.pdf

1、原發(fā)性肝癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是我國的常見惡性腫瘤，防治肝癌是全世界防治疾病的重要任務，是醫(yī)學領域亟待解決的重大課題。
　　 p160蛋白家族的乳腺癌擴增性抗原1(Amplified in Breast Cancer1，AIB1)是一種具有多種生理學功能的轉錄協(xié)同因子，它能夠與核受體等多種轉錄因子相互作用從而增強它們的轉錄活性。多項研究證明，A1B1在多種腫瘤的惡化過程中起重要的作用。AI

2、B1在68％的肝癌組織中過表達，并且能夠促進肝癌細胞的增殖、侵襲和成瘤，是一種公認的癌基因。AIB1由多個功能性結構域組成，其中CBP/p300相互作用結構域（CBP/p300-interaction domain，CBP）參與了AIB1與輔激活因子CBP/p300的結合，而CBP/p300在核受體上的募集是AIB1發(fā)揮反式激活作用，行使其促轉錄作用的必要條件。
　　 SELEX是“配體通過指數富集達到系統(tǒng)進化”(Systema

3、tic evolution of ligandsby exponential enrichment)的縮寫，用于研究小分子核酸與靶物質相結合的部位、序列及空間構象。經SELEX篩選出的配體為適配子(Aptamer)，能夠起到識別靶標蛋白甚至其生物活性抑制的作用。
　　 因此，我們計劃用SELEX技術篩選獲得特異性和AIB1的CID結構域結合，并抑制AIB1對CPB/p300的募集作用的核酸適配子，從而抑制其促轉錄激活作用，為肝癌

4、的治療提供了創(chuàng)新性的思路和方法。
　　 本文以AIB1蛋白的CID結構域為靶標，構建其真核表達載體，獲得AIB1-CID-Flag融合蛋白，經過12輪的篩選，獲得了8條強結合能力的單鏈DNA核酸適配子。我們選擇其中最優(yōu)的23號序列作為研究對象，分別檢測了它與AIB1五個功能結構域的結合情況和與p160家族三個成員的結合情況。最后，我們用免疫共沉淀驗證了篩選所得的CID23核酸適配子能夠抑制AIB1對p300蛋白的募集作用。說明我