組織蛋白酶S在支架植入術(shù)后再狹窄形成中作用機制的研究.pdf

1、目的：觀察比格犬通過球囊損傷結(jié)合氮氣干燥比格犬頸動脈內(nèi)皮細胞形成頸動脈粥樣硬化狹窄模型,以及支架植入術(shù)后再狹窄過程中新生內(nèi)膜形成過程中組織蛋白酶S的作用。方法：15只雄性健康的實驗比格犬,按照隨機的原則分為假手術(shù)組(A組)、球囊氮氣損傷組(B組)、球囊氮氣損傷支架植入組(C組)、各個組由4只比格犬組成。有3只進行球囊氮氣損傷后造模備用,假手術(shù)組(A組)在暴露雙側(cè)頸總動脈后不對血管進行任何的處理然后將傷口縫合,B、C組雙側(cè)頸總動脈均進行氮

2、氣加球囊損傷內(nèi)皮細胞,造模后均給予高脂飲食2個月,造模2個月后在進行DSA檢查并在C組比格犬右側(cè)頸總動脈中植入支架,之后普通飲食喂養(yǎng),在造模前、支架植入前3天和植入后7天,2個月分別行頸部血管彩超檢查,觀察頸總動脈斑塊形成及狹窄情況,支架植入后2個月時再次行DSA檢查,觀察頸部血管狹窄及支架情況,并取比格犬雙側(cè)頸總動脈,將右側(cè)頸總動脈用于病理形態(tài)學檢測,以免疫組化法檢測組織蛋白酶S、增殖細胞核抗原、a-平滑肌肌動蛋白的表達情況,將左側(cè)頸

3、總動脈標本保存好為備用。結(jié)果：1、在造模過程中有2只比格犬死亡,立即用備用的造模的比格犬補上，在最后取血管標本的過程中，有一只比格犬死亡,死亡原因可能均為麻醉意外所致,其余12只比格犬在取出雙側(cè)頸總動脈后,仍存活良好。2、HE染色示A組(假手術(shù)組)無內(nèi)膜增生,B組(球囊氮氣損傷組)內(nèi)膜增生明顯,可見大量粥樣硬化斑塊和新生內(nèi)膜,C組(球囊氮氣損傷支架植入組)也可看到在支架植入后出現(xiàn)內(nèi)膜增生。3、組織蛋白酶 S免疫組織化學結(jié)果表示 A組(假

4、的手術(shù)組)的血管中膜上可見少量棕黃色陽性顆粒,B組(球囊氮氣損傷組)、C組(球囊氮氣損傷支架植入組)中膜和內(nèi)膜均可以看到棕黃色陽性顆粒表達較多,內(nèi)膜棕黃色陽性的顆粒表達比中膜表達更明顯、染色更深,組織蛋白酶 S免疫組化光密度值在A、B、C組比較中,C組(球囊氮氣損傷支架植入組)高于B組(球囊氮氣損傷組), A組光密度值最低, P=0.000<0.05。4、a-平滑肌肌動蛋白免疫組織化學代表的平滑肌細胞的結(jié)果中A組(假手術(shù)組)表現(xiàn)為血管的

5、中膜的平滑肌的細胞呈整齊的排列,有少數(shù)出現(xiàn)紊亂的表現(xiàn),無新生內(nèi)膜形成,表明經(jīng)過2個月的高脂飲食喂養(yǎng)后,平滑肌細胞出現(xiàn)輕微增殖、遷移的表現(xiàn),但尚未形成新生內(nèi)膜。 B組(球囊氮氣損傷組)、C組(球囊氮氣損傷支架植入組)中膜平滑肌細胞的排列較紊亂,且新生內(nèi)膜上見大量的平滑肌細胞,表明平滑肌細胞遷移到內(nèi)彈力膜外進行大量增殖,形成新生內(nèi)膜, a-平滑肌肌動蛋白的免疫組織化學的光密度值在 A、B、C組的比較中,B(球囊氮氣損傷組)、C(球囊氮氣損傷

6、支架植入組)組高于A組(假手術(shù)組),且C組(球囊氮氣損傷支架植入組)高于B(球囊氮氣損傷組),表明支架植入后由于炎性刺激增加了平滑肌增殖和遷移的程度。5、增殖細胞核抗原免疫組化結(jié)果示A組(假手術(shù)組)見少量弱陽性棕黃色顆粒表達,B(球囊氮氣損傷組)、C(球囊氮氣損傷支架植入組)組中增殖細胞核抗原陽性表達明顯多于A組(假手術(shù)組),且主要位于中膜和內(nèi)膜中,C組(球囊氮氣損傷支架植入組)在支架周圍增殖細胞核抗原陽性顆粒較多,增殖細胞核抗原免疫組

7、化光密度值在 A(假手術(shù)組)、B(球囊氮氣損傷組)、C(球囊氮氣損傷支架植入組)組比較中,B(球囊氮氣損傷組)、C組(球囊氮氣損傷支架植入組)高于A組,且C組高于B組, P=0.000<0.05,表明支架長期的炎性刺激使細胞的增殖更多。
　　結(jié)論：1.采用氮氣干燥法結(jié)合球囊損傷內(nèi)皮細胞,再飼以高脂飲食,能較好的建立比格犬頸總動脈粥樣硬化狹窄模型。2.比格犬頸動脈經(jīng)過球囊損傷和氮氣損傷內(nèi)皮細胞后增生的新生內(nèi)膜中組織蛋白酶S的蛋白和a