Foxp3,Fas,FasL,COMT基因多態(tài)性與漢族尋常型銀屑病相關(guān)性分析.pdf

1、銀屑病是一種反復(fù)發(fā)作，具有特征性鱗屑性紅斑的慢性自身免疫性皮膚病，其發(fā)病率高、危害大、治療困難。在自然人群中的發(fā)病率為0.1％-3％，我國約有300萬患者，發(fā)病率有逐年上升的趨勢，國際衛(wèi)生組織將其列為影響人類健康的重要疾病。目前銀屑病的發(fā)病機制尚不清楚，近十幾年來，關(guān)于銀屑病的病因和發(fā)病機制的研究主要集中于基因異常、免疫炎癥機制、環(huán)境因素等方面。流行病學(xué)研究表明銀屑病具有家族聚集性，是一種多基因遺傳病。但任何單一因素均不能完全解釋銀屑病

2、的發(fā)病機理，有學(xué)者認為多因素、多基因累積共同導(dǎo)致了銀屑病的發(fā)生，不同的個體可能存在不同的病因組合，其中遺傳基因的易感性占據(jù)了重要的地位。
　　尋找與疾病相關(guān)的致病基因的方法大致可以分為兩種：連鎖分析和關(guān)聯(lián)研究。關(guān)聯(lián)研究主要以病例對照研究為基礎(chǔ)，通過研究患者和正常對照的基因多態(tài)性位點基因型和等位基因頻率的差異，從而判斷該基因與疾病易感性的關(guān)系。近年來的研究表明皮膚角質(zhì)形成細胞異常及自身免疫失衡相關(guān)的細胞和分子在銀屑病的發(fā)病機制中具有

3、重要作用，然而目前對基因多態(tài)性與銀屑病易感性的關(guān)系少有研究。為此，本課題選擇了四個與皮膚角質(zhì)形成細胞異常及自身免疫緊密相關(guān)的基因作為研究重點，試圖尋找其基因多態(tài)性和銀屑病發(fā)病的相關(guān)性。
　　Foxp3叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子在外周T細胞中表達的精密控制對于維持免疫系統(tǒng)的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定具有重要意義。轉(zhuǎn)錄因子Foxp3可特異表達于胸腺和外周淋巴組織中天然的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞亞群上，可以認為Foxp3是CD4+CD25+調(diào)節(jié)性

4、T細胞發(fā)育的調(diào)控機制中的重要開關(guān)。CD4+CD25+Treg細胞與效應(yīng)性T細胞的免疫失衡，導(dǎo)致自身反應(yīng)性T細胞的活化是銀屑病免疫學(xué)發(fā)病機制的中心環(huán)節(jié)。目前已證實Foxp3基因突變同多種自身免疫性疾病的發(fā)生相關(guān)，而在銀屑病這種自身免疫性皮膚病的發(fā)生中，F(xiàn)oxp3基因的變化是否通過調(diào)控CD4+CD25+Treg細胞直接或者間接發(fā)揮作用尚未得到證實。在本研究中我們探討了Foxp3基因-6054(deletion/ATT,rs5902434)位

5、點、-3279(A/C,rs376158)位點、-924(A/G,rs2232365)位點和IVS9+459(A/G,rs2280883)基因多態(tài)性與銀屑病易感性的關(guān)系。
　　Fas/FasL系統(tǒng)通過凋亡及致炎作用途徑與銀屑病的發(fā)生緊密聯(lián)系。研究結(jié)果表明銀屑病皮損組織中Fas、FasL的強表達是導(dǎo)致患者表皮角質(zhì)形成細胞異常凋亡的機制之一。Fas、FasL的表達異常使T淋巴細胞異常凋亡，進而導(dǎo)致免疫耐受失控，成為自身免疫性疾病的機理

6、之一。Fas/FasL信號通路的另一路徑是誘導(dǎo)炎癥因子，尤其是腫瘤壞死因子（TNF-α）和白介素8（IL-8），該途徑在表達抗凋亡分子如Bcl-xL水平較高的細胞中有明顯優(yōu)勢。致炎的Fas信號通路通過活化的淋巴細胞介導(dǎo)銀屑病的發(fā)生。國外已有研究證實Fas、FasL基因多態(tài)性與自身免疫性疾病的相關(guān)性，但Fas、FasL基因多態(tài)性與漢族銀屑病患者的相關(guān)性目前未見報道。為此，我們對漢族銀屑病患者和正常對照者進行Fas-1377、Fas-670

7、、FASLG-844和FASLG-IVS2nt-124基因多態(tài)性檢測，探討其基因多態(tài)性在漢族人群中的分布及其與銀屑病的相關(guān)性。
　　兒茶酚鄰位甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)催化兒茶酚胺第3位羥基甲基化，是降解兒茶酚胺的主要代謝酶。文獻表明COMT基因第4號外顯子存在一個G>A點突變使158密碼子從纈氨酸(Val)到蛋氨酸(Met)錯義突變，導(dǎo)致COMT酶活性降低，神經(jīng)末梢產(chǎn)生的兒茶酚胺類物質(zhì)的增加可以直接損傷表皮細胞，同時不能阻止表皮細胞

8、中毒物-o-醌的形成，誘發(fā)角質(zhì)形成細胞氧化損傷，導(dǎo)致銀屑病的發(fā)生和加重。有研究表明COMT-158(G>A)單核苷酸基因多態(tài)性與銀屑病的發(fā)病有一定相關(guān)性。但目前COMT-158(G>A)單核苷酸基因多態(tài)性與漢族人群銀屑病易感性的關(guān)系尚無研究。
　　目的：分析Foxp3基因、Fas基因、FasL基因、COMT基因單核苷酸多態(tài)性與中國漢族人群銀屑病發(fā)病的相關(guān)性，探討銀屑病的遺傳學(xué)背景及發(fā)病機制。
　　方法：對524例銀屑病患者和

9、549例正常對照抗凝血，抽提基因組DNA，使用PCR-RFLP和PCR-SSP方法分別檢測Foxp3基因-6054(deletion/ATT,rs5902434)、-3279(A/C,rs376158)、-924(A/G,rs2232365)和IVS9+459(A/G,rs2280883)四個位點單核苷酸多態(tài)性。使用PCR-RFLP方法檢測Fas-1377、Fas-670、FASLG-844和FASLG-IVS2nt-124四個位點基因

10、單核苷酸多態(tài)性。使用PCR-SSP方法檢測兒茶酚鄰位甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）基因第4外顯子158密碼子堿基單核苷酸多態(tài)性。對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，探討Foxp3基因、Fas基因、FasLG基因、COMT基因單核苷酸多態(tài)性與中國漢族人群銀屑病發(fā)病的相關(guān)性。
　　結(jié)果：Foxp3-3279AC(adjustedoddsratio[OR],1.32;95％CI,1.01-1.74)和IVS9+459GG(adjustedoddsratio[

11、OR],2.24;95％CI,1.41-3.58)基因型中國漢族銀屑病的發(fā)病與發(fā)展存在相關(guān)性；Foxp3-3279變異聯(lián)合基因型AC+AA顯著增加男性人群（adjustedOR=1.60,95％CI=1.11-2.31）罹患銀屑病的危險性，同時與病情較重的銀屑病發(fā)?。≒ASIscore>20）人群（adjustedOR=1.97,95％CI=1.41-2.75）有顯著相關(guān)性。IVS9+459變異聯(lián)合基因型GA+GG與病情較重的銀屑病發(fā)病

12、（PASIscore>20）人群（adjustedOR=1.69,95％CI=1.21-2.36）有顯著相關(guān)性。Foxp3-6054位點ATT插入型等位基因頻率在銀屑病患者和正常對照組之間沒有顯著差異（32.1％vs.29.3％,P=0.174）。Foxp3-924位點G等位基因頻率在銀屑病患者和正常對照組之間亦無顯著差異（42.6％vs.40.0％,P=0.238）。
　　通過PCR-RFLP方法發(fā)現(xiàn)，所選擇樣本中Fas-137

13、7位點A等位基因頻率在銀屑病患者和正常對照組之間沒有顯著差異(32.8％vs.35.6％,P=0.187)。Fas-670位點G等位基因頻率在銀屑病患者和正常對照組之間沒有顯著差異(37.2％vs.39.1％,P=0.389)。FASLG-844位點T等位基因頻率在銀屑病患者和正常對照組之間沒有顯著差異(26.5％vs.23.4％,P=0.100)。Fas-1377G/A和Fas-670A/G兩點單倍體分析和單倍體聯(lián)合分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以沒

14、有突變的AG等位基因做為參照，GG與GA單倍體等位基因具有降低罹患銀屑病危險性的趨勢，AA單倍體等位基因降低罹患銀屑病危險性的趨勢具有統(tǒng)計學(xué)意義。聯(lián)合分析發(fā)現(xiàn)以GA+AA/AA做為參照，其余三組GG/AA，GG/GG+GA，GA+AA/GG+AA顯著降低罹患銀屑病的危險性。
　　通過PCR-SSP方法發(fā)現(xiàn)，COMT-158位點A等位基因頻率在銀屑病患者中無顯著增高(24.7％vs.23.7％,P=0.624)。與COMT-158G

15、G基因型相比，-158GA(adjustedoddsratio[OR],1.00;95％CI,0.78-1.29)和-158AA(adjustedOR,1.23;95％CI,0.70-2.15)基因型不會增加罹患銀屑病的危險性。聯(lián)合基因型GA+AA與銀屑病發(fā)病年齡和疾病嚴重程度之間均無顯著相關(guān)性。
　　結(jié)論：本研究首次分析了中國漢族人群中Foxp3、Fas、FasL、COMT基因單核苷酸多態(tài)性和單倍體基因型與銀屑病發(fā)病的相關(guān)性，發(fā)

16、現(xiàn)Foxp3-3279(A/C,rs376158)和IVS9+459(A/G,rs2280883)位點基因多態(tài)性和漢族人尋常型銀屑病發(fā)病相關(guān)，證實了Foxp3基因水平的變化與銀屑病的關(guān)系，為研究漢族人群銀屑病易感基因打下基礎(chǔ)，也提示Foxp3可能會成為治療銀屑病的一個靶分子，為拓展銀屑病的臨床治療途徑提供基因?qū)W基礎(chǔ)。Fas-1377、Fas-670、FASLG-844三個功能性多態(tài)性位點及COMT-158位點均未發(fā)現(xiàn)與銀屑病易感性相關(guān)。