二氯醋酸二異丙胺對重癥胰腺炎肝臟損傷的保護機制研究.pdf

1、目的:探討DADA(復方二氯醋酸二異丙胺注射液；肝樂)對重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis；SAP)大鼠肝臟細胞凋亡指數(shù)及Bcl-2、細胞色素C及Fas基因表達的影響,以及其對ALT(Aspertate aminotransferase:ALT；谷草轉(zhuǎn)氨酶)、AST(Alanineaminotransferase；AST；谷丙轉(zhuǎn)氨酶)及膽紅素的影響,探討DADA對重癥胰腺炎肝臟損傷的保護機制。
　　

2、 方法:雄性SD大鼠78只,體重250g～300g,隨機分為正常組(N組),假手術組,重癥急性胰腺炎模型組(SAP組),肝樂治療組(DADA組)。胰腺炎組采用5％?；悄懰徕c1ml／kg(注射速度0.2ml／min)逆行胰膽管注射方法復制大鼠重癥急性胰腺炎模型,造模成功以后再隨機分為SAP組和DADA組,假手術組開腹后翻動腸壁即關腹。術后禁食,清醒后自由進水。DADA組大鼠在模型制備成功后10min開始給予肝樂注射液(0.357mL／k

3、g／12h)尾靜脈注射；SAP組大鼠采用同樣方法給予等量的生理鹽水。于12h、24h、48h、72h時間點每組分別處死各組大鼠；對各組大鼠胰腺損傷、肝臟損傷進行大體形態(tài)和光鏡下觀察,并行肝臟組織病理評分；全自動生化分析儀測定大鼠血清AMY(amylase；血清淀粉酶)、AST、ALT、DBIL(Direct bilirubin；直接膽紅素)、TBIL(Total bilirubin；總膽紅素)、IBIL(Indirect bilirub

4、in；間接膽紅素)；用TUNEL法測定肝臟細胞凋亡指數(shù),SABC免疫組化染色法測定肝臟Bcl-2、Fas、細胞色素C基因表達。所有結(jié)果均用SPSS13.0軟件分析,行方差分析。
　　 結(jié)果:1、胰腺組織病理改變:(1)胰腺大體形態(tài)上改變,各時間點的正常組及假手術組大鼠胰腺形態(tài)均未見明顯異常。SAP12h組大鼠胰腺顏色紫暗,腹腔內(nèi)有明顯的腹水,但腹水量少,胰腺充血水腫明顯,并且可見局部的胰腺組織出血、壞死；24h組大鼠胰腺呈灰褐色

5、,腹腔內(nèi)可見大量腹水,胰腺與周圍臟器有部分的粘連,并可見粘連處的胰腺組織有片狀的出血、壞死；48h組大鼠胰腺呈明顯的灰褐色,腹腔內(nèi)可見大量的血性腹水,胰腺與周圍臟器有大面積的粘連,粘連處的胰腺組織有廣泛的出血、壞死；72h組大鼠腹腔內(nèi)可見大量的血性惡臭腹水,胰腺組織周圍腸管嚴重淤脹,胰腺呈明顯的灰褐色,胰腺與周圍臟器有大面積的粘連,并可見粘連處的胰腺組織有大面積的出血、壞死及壞死灶內(nèi)的鈣化灶。DADA組各時間點大鼠雖然同樣可以見到腹腔內(nèi)

6、不同程度的腹水,胰腺顏色變淡甚至紫暗,胰腺與周圍臟器粘連,粘連處的胰腺組織有出血、不同程度的壞死等結(jié)構(gòu)改變,但程度較SAP組對應時間點大鼠胰腺組織大體形態(tài)改變明顯減輕。(2)光鏡下胰腺組織結(jié)構(gòu)改變:正常組及假手術組各時間點大鼠胰腺組織結(jié)構(gòu)光鏡下結(jié)構(gòu)保持完整,胰腺間質(zhì)內(nèi)無炎細胞浸潤及其他病理改變。SAP12h組可見胰腺組織的葉間隔、小葉間隔及胰腺腺泡間隔增寬,部分的胰腺小葉結(jié)構(gòu)紊亂,胰腺腺泡細胞腫脹,胰腺的腺泡間隔內(nèi)可見炎細胞浸潤,胰腺組

7、織有灶性出血、壞死；24h組部分正常的胰腺小葉結(jié)構(gòu)消失,胰腺腺泡細胞嚴重腫脹,胰腺腺泡間隔內(nèi)可見大量的炎細胞浸潤,胰腺組織有片狀出血、壞死；48h組胰腺正常的小葉結(jié)構(gòu)消失,胰腺腺泡細胞極度腫脹,腺泡間隔內(nèi)可見大量的炎細胞浸潤,胰腺組織可見廣泛出血、壞死；72h組胰腺組織正常的小葉結(jié)構(gòu)消失,胰腺腺泡細胞極度腫脹,胰腺腺泡間隔內(nèi)可見大量的炎細胞浸潤,胰腺組織內(nèi)可見廣泛的出血、壞死,壞死區(qū)內(nèi)可見明顯的鈣化灶。DADA組大鼠光鏡下胰腺組織同樣可

8、見胰腺小葉結(jié)構(gòu)紊亂,間質(zhì)內(nèi)炎細胞浸潤,胰腺腺泡細胞腫脹,并可見不同程度的胰腺組織出血、壞死等病理改變,但其程度較SAP組對應時間點的胰腺組織有改變明顯的減輕。2、肝臟組織結(jié)構(gòu)病理改變及肝臟組織病理學評分:(1)大體形態(tài)改變,各時間點N組及假手術組大鼠肝臟大體形態(tài)均未見明顯的異常。SAP組12h時見肝臟體積略增大,包膜正常；24h時見肝臟體積增大,包膜緊張,與胰腺有少許的粘連；48h時見肝臟體積增大,包膜緊張,顏色稍淡,與胰腺粘連明顯,可

9、見粘連部位肝臟組織壞死；72h時見肝臟體積明顯增大,包膜緊張,顏色明顯變淡,與胰腺粘連較重,與胰腺粘連部位肝臟組織明顯壞死。DADA組12h時肝臟大體形態(tài)與SAP組12h時無明顯差異；24h時肝臟體積增大；48h時肝臟體積增大,包膜略緊張,少數(shù)與胰腺組織粘連,粘連處可見點片狀的肝臟組織壞死。72h時肝臟體積增大,包膜略緊張,與胰腺組織粘連明顯,粘連處可見明顯的肝臟組織壞死灶,但較SAP組明顯的減輕。(2)光鏡下觀察肝臟組織結(jié)果改變:N組

10、及假手術組大鼠各時間點肝臟組織形態(tài)未見明顯的異常。SAP組12h時肝細胞輕度水腫,細胞間隙增寬:24h時肝細胞腫脹加重伴炎性細胞浸潤改變,脂肪變少數(shù)有紅細胞淤積；48h時可見局灶性或不規(guī)則片狀肝細胞壞死,肝竇及匯管區(qū)周圍大量炎性細胞浸潤及大量紅細胞；72h時可見較大面積的局灶性或不規(guī)則片狀肝細胞壞死,肝竇及匯管區(qū)周圍大量炎性細胞浸潤及紅細胞。DADA各組仍可肝細胞的腫脹、炎細胞的浸潤及區(qū)域的肝細胞壞死等改變,但程度較SAP組減輕。(3)

11、組織病理學評分:假手術組、SAP組、DADA組大鼠肝臟組織病理學評分12h時SAP組高于假手術組(P<0.05),DADA組與SAP組無明顯差異(P>0.05)；24h、48h、72h時分別為SAP組高于假手術組(P<0.05),DADA組低于SAP組(P<0.05)；72h時達到高峰。3、AMY、AST、膽紅素于各時間點假手術組無明顯的改變,SAP組、DADA組各時間點較假手術組明顯的升高(P<0.05),DADA組低于SAP組(P<

12、0.05)。4、肝臟細胞凋亡指數(shù)、Fas、細胞色素C基因表達各時間點假手術組無明顯的改變(P>0.05),SAP組、DADA組各時間點較假手術組明顯的升高(P<0.05),DADA組低于SAP組(P<0.05)。Bcl-2基因表達各時間點假手術組無明顯的改變,SAP組、DADA組各時間點較假手術組明顯的降低(P<0.05),DADA組高于SAP組(P<0.05)。
　　 結(jié)論:1、DADA對大鼠胰腺肝臟損害具有保護作用,可能為臨