二氯醋酸二異丙胺抗肝纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.體外實(shí)驗(yàn)研究不同濃度二氯醋酸二異丙胺（Diisopropylamine Dichloroacetate, DPDA）對(duì)肝星狀細(xì)胞及正常肝細(xì)胞增殖的影響。
　　2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究DPDA對(duì)四氯化碳（Carbon tetrachloride, CCl4）誘導(dǎo)肝纖維化小鼠模型纖維化的逆轉(zhuǎn)作用。
　　方法：1.體外實(shí)驗(yàn)：采用不用濃度的DPDA處理人肝星狀細(xì)胞株LX2細(xì)胞及正常肝細(xì)胞株LO2細(xì)胞，用MTT法檢測DPDA對(duì)兩種細(xì)

2、胞株增殖的影響；用Western Blot檢測LX2細(xì)胞相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。
　　2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：將50只雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分成三組，即對(duì)照組（n=10），CCl4組（n=30，分為4w、8w、12w組），CCl4+DPDA組（n=10）。采用CCl4誘導(dǎo)法構(gòu)建肝纖維化小鼠模型，腹腔注射含25％CCl4的橄欖油混合液，2μL/g體重，每周兩次，共持續(xù)12周。CCl4（4w、8w組）分別于4w、8w末處死，取肝臟組織。CCl4

3、+DPDA組于第8周開始使用DPDA（15mg/kg體重）灌胃處理，CCl4（12w組）于第8周開始使用等體積PBS灌胃處理，共灌胃4周。于12w末處死小鼠，取肝臟組織。標(biāo)本行HE及Masson染色，對(duì)肝纖維化程度進(jìn)行評(píng)價(jià)；RT-PCR、免疫組織化學(xué)、Western Blot檢測各組小鼠肝組織中α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（alpha-Sooth muscle actin,α-SMA）、肌間線蛋白（Desmin）、Ki67、轉(zhuǎn)化生長因子（Tran

4、sforming growth factor-beta1, TGF-β1）、纖維連接蛋白（Fibronectin, FN）、I型膠原mRNA和（或）蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：不同濃度的DPDA作用于LX2細(xì)胞48h后，顯示出明顯的抑制增殖作用，IC50為（13.2±0.71）mmol/l；低濃度的DPDA對(duì)LX2細(xì)胞的增殖同樣有抑制作用，且當(dāng)DPDA濃度低于1mmol/l時(shí)，對(duì)LO2細(xì)胞有促增殖作用；與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

5、（P<0.05）。與CCl4組相比，CCl4+DPDA組的HE及Masson染色均顯示小鼠肝纖維程度減輕；RT-PCR、免疫組織化學(xué)、Western Blot結(jié)果顯示CCl4+DPDA組α-SMA、Desmin、TGF-β1、FN、I型膠原的mRNA和（或）蛋白的表達(dá)量下調(diào)。
　　結(jié)論：1.DPDA對(duì)肝星狀細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用，低濃度時(shí)對(duì)正常肝細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用。
　　2.DPDA對(duì)CCl4誘導(dǎo)纖維化小鼠模型的纖維化有