FQ-PCR及RNA實時熒光恒溫擴增技術在兒童肺炎支原體肺炎診治中的價值.pdf

1、研究背景及目的：
　　肺炎支原體（MP）引起的肺炎支原體肺炎（MPP）好發(fā)于學齡前及學齡兒童，占兒童社區(qū)獲得性肺炎的10-40％。MPP在臨床表現(xiàn)、影像學上無特異性，對β-內酰胺類抗生素天然耐藥而首選大環(huán)內酯類治療。近年我國大環(huán)內酯類耐藥肺炎支原體（MRMP）逐漸增多，MRMP感染可能導致患兒病情加重及治療困難,而大環(huán)內酯類藥物過度使用又會導致耐藥發(fā)生。故早期、準確的實驗室檢測方法對臨床診斷MP感染和指導治療至關重要。本研究采用實

2、時熒光定量PCR（FQ-PCR）及RNA實時熒光恒溫擴增（SAT）技術檢測MP，以了解FQ-PCR及SAT技術的早期診斷價值；評價MPP患兒急性期痰液MP-DNA載量與臨床特征的相關性；并主要探討MPP患兒經(jīng)大環(huán)內酯類治療1個療程后痰液MP-RNA結果與MP載量、MP耐藥、臨床療效等的關系，評價大環(huán)內酯類藥物的治療效果，為判斷支原體肺炎疾病的病情，轉歸及預后提供新思路。另外，免疫炎癥因子的水平可能可以預測疾病的嚴重程度。
　　方法

3、：
　　選取2015年6月-2016年11月期間于我院住院并確診為MPP的60例患兒，在入院當天（急性期）和經(jīng)大環(huán)內酯類治療1療程結束后當天（治療后)同時采用FQ-PCR檢測痰液MP-DNA、SAT檢測痰液MP-RNA，ELISA檢測血清MP-IgM抗體，比較三種檢測方法的陽性率；選取其中血清MP-IgM為陽性，急性期MP-RNA及MP-DNA均陽性，且院前未經(jīng)大環(huán)內酯類治療的50例MPP患兒為主要研究對象，巢式PCR聯(lián)合DNA測

4、序技術檢測MP23SrRNA基因突變，分析大環(huán)內酯類耐藥率及基因突變特點，同時采用ELISA方法檢測患兒血清的IL-10、IFN-γ、TNF-α水平，并收集進行臨床分析。50例患兒根據(jù)不同標準分組：①根據(jù)急性期痰液MP-DNA載量（以106copies/ml為界限）分為低菌量組18例（MP-DNA≤106copies/ml）與高菌量組32例（MP-DNA＞106copies/ml）；比較兩組MPP患兒在臨床癥狀、肺外并發(fā)癥、實驗室檢查、

5、影像學、治療上的差別。②根據(jù)經(jīng)大環(huán)內酯類藥物治療1療程后痰液MP-RNA檢測結果：分為MP-RNA陽性組28例和MP-RNA轉陰組22例；比較兩組MPP患兒在MP-DNA載量， MP耐藥，臨床療效，實驗室檢查，影像學，治療上的差別。
　　結果：
　　1、60例MPP患兒中，急性期檢測MP陽性率血清學為55%，F(xiàn)Q-PCR為90.0%， SAT技術為88.3%，急性期FQ-PCR、SAT技術檢測MP陽性率明顯高于血清學，差異有

6、統(tǒng)計學意義（P＜0.05），F(xiàn)Q-PCR與SAT之間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療后復測MP陽性率血清學86.7%，F(xiàn)Q-PCR為76.7%， SAT為50.0%，F(xiàn)Q-PCR、血清學檢測MP陽性率明顯高于SAT，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），F(xiàn)Q-PCR與血清學之間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2、與急性期低菌量組MPP患兒相比，急性期高菌量組MPP患兒總熱程、使用大環(huán)內酯類后熱程、住院時間更長，總

7、熱程≥7d及高熱患兒的比例更高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。實驗室檢查上，高菌量組外周血淋巴細胞百分數(shù)及絕對值低于低菌量組，而中性粒細胞百分比、IL-10水平高于低菌量組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3、比較治療后MP-RNA陽性組與MP-RNA轉陰組，①兩組患兒急性期痰液MP-DNA拷貝數(shù)相關性差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；MP-RNA陽性組中治療前后痰液MP-DNA拷貝數(shù)下降程度＜10倍的比例較MP-

8、RNA轉陰組更高，而治療前后MP-DNA拷貝數(shù)下降程度≥1000倍的比例較MP-RNA轉陰組明顯更低，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。②MP-RNA陽性組患兒含耐藥基因率高于MP-RNA轉陰組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。③與治療后MP-RNA轉陰組MPP患兒相比，MP-RNA陽性組MPP患兒的住院時間、總發(fā)熱時間、退熱時間、咳嗽緩解時間更長，血清IFN-γ水平更高，聯(lián)合激素及其他抗菌藥物治療的比例更高，差異均有統(tǒng)計學意義（P

9、＜0.05）；在其他實驗室檢查、影像學及大環(huán)內酯類治療上差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論：
　　1、FQ-PCR及RNA實時熒光恒溫擴增（SAT）技術檢測兒童MP感染早期陽性率明顯高于血清學。
　　2、兒童MPP急性期痰液MP-DNA載量與臨床特征有相關性，高菌量組患兒病情相對更為嚴重。
　　3、SAT技術檢測MPP患兒痰MP-RNA可反映疾病病情及大環(huán)內酯類治療療效。當經(jīng)大環(huán)內酯類藥物治療1療程后M