弱氧化修飾低密度脂蛋白對ECV304組織因子基因表達的影響及其信號轉(zhuǎn)導機制探討.pdf

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學;中國醫(yī)學科學院碩士學位論文弱氧化修飾低密度脂蛋白對ECV304組織因子基因表達的影響及其信號轉(zhuǎn)導機制探討姓名：陸曉茜申請學位級別：碩士專業(yè)：病理生理學指導教師：朱廣瑾2002.5.1中國協(xié)和醫(yī)科大學碩士生論文一2制研究，并探討銀杏內(nèi)脂B 的干預作用，為闡明內(nèi)皮細胞功能紊亂引發(fā)A S 的機理及其防治措施提供實驗依據(jù)。／／ 本研究主要內(nèi)容包括：·{1 1 、m m L D L 對E C V 3 0 4 T F 蛋

2、白含量及m R N A 水平的影響。2 ) C a ”、P K C 在m m L D L 對E C v 3 0 4 T F 基因表達中的信號轉(zhuǎn)導作用。3 ) 銀杏內(nèi)脂B 在m m L D L 誘導E C V 3 0 4 T F 基因表達中的干預作用。研究結(jié)果如下：1 ．m m L D L 對E C V 3 0 4 T F 蛋白含量及m R N A 水平的影響。采用酶聯(lián)免疫吸附法( E n z y m e —l i n k e dI m

3、m u n o s o r b e n t A s s a y , E L I S A ) 檢測m m L D L作用E C V 3 0 4 后細胞表面T F 蛋白水平的變化。結(jié)果顯示m m L D L 使E C V 3 0 4 表面T F 蛋白表達增加，且呈量效依賴關(guān)系( P < o ．0 5 ) 。采用反轉(zhuǎn)錄一多聚酶鏈反應( R T —P C R ) 方法檢測m m L D L 對E C V 3 0 4 T Fm R N A

4、水平的影響，用圖象分析處理系統(tǒng)進行灰度掃描，做掃描面積積分半定量分析，比較實驗組( m m L D L 刺激組) 和正常對照組的T F ／D —a c t i n 灰度比值。結(jié)果顯示4 0 ¨g ／m Lm m L D L 作用組中T F m R N A 明顯升高，為正常對照組的2 2 4 倍。2 ．C a ”、P K C 在m m L D L 對E C V 3 0 4 T F 基因表達中的信號轉(zhuǎn)導作用。采用激光共聚焦顯微鏡技

5、術(shù)( L a s e r —s c a n n i n g C o n f o c a l m i c r o s c o p e ) ，觀察在m m L D L 作用下單個E C V 3 0 4 胞內(nèi)【C a 2 + 】。的變化，以探討胞內(nèi)C a 2 + 在m m L D L 誘導E C V 3 0 4 T F 基因表達中的作用。結(jié)果表明，【C a l + 】，基礎(chǔ)值于6 0 0 s 保持穩(wěn)定，2 0 、4 0 、s 0 , J m

6、L 的m m L D L 使E C V 3 0 4 胞內(nèi)【C a 2 + 】，迅速增加，并在8 0 0 s 出現(xiàn)峰值，分別為基礎(chǔ)值的1 ．5 、2 和3 倍。更換細胞孵育液為含鈣離子液后，以上各濃度m m L D L 對E C V 3 0 4 【C a 2 + 】，均無明顯影響。采用P K C 抑制劑s t a u r o s p o r i n e 進行藥物干預實驗，分別從蛋白含量及m R N A水平檢測T F 的變化，結(jié)果顯示，4