PDE4D基因多態(tài)性與河南漢族人群缺血性腦血管病的相關性研究.pdf

1、背景與目的：
　　 缺血性腦血管病(ischernic cerebrovascular diseaSe ICVD)是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用而導致的一種多基因遺傳病,發(fā)病機制異常復雜,其發(fā)病率、致殘率及死亡率高,給個人、家庭及社會帶來沉重的負擔。我國屬于缺血性腦血管病的高發(fā)國家,并且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。對現有的已知危險因素如高血壓、糖尿病、高血脂、動脈粥樣硬化、心律不齊、吸煙等進行良好控制后,許多患者仍不可避免地發(fā)生腦血管

2、病,這促使學者們不斷尋找新的腦血管病的危險因素,特別是從基因水平確定不同個體對腦血管病的易感性。
　　 2003年,卒中基因解碼科學小組人員在冰島人群中發(fā)現了與家族性缺血性腦血管病相關的基因:磷酸二酯酶4D(phosphodiesterase4D PDE4D)基因與腦動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展有關。PDE4D為第二信使環(huán)磷酸腺苷(eyclicAdenosineMonophosphate cAMP)特異性PDE,PDE4D可通過其水平

3、和活性的變化影響細胞內cAMP水平,cAMP水平影響血管細胞的增殖和移行,參與動脈粥樣硬化的進程,從而增加心腦血管疾病的發(fā)病風險。該基因和以往認識的與糖尿病、血脂代謝異常、高血壓等腦血管病危險因素的相關基因是不同的,其對缺血性腦血管病具有獨立的致病作用,被認為是新發(fā)現的卒中候選基因。
　　 為了進一步探討PDE4D基因多態(tài)性與ICVD的相關性,本研究利用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性(Polymerase chain rea

4、ction restriction-fragmentlength polymorphism PCR-RFLP)技術,在河南漢族人群中對PDE4D rs918592和rs2910829位點多態(tài)性進行檢測,研究其分布情況,并進一步探討該位點多態(tài)性與ICVD相關性。從而為腦血管病的預防研究提供理論依據。
　　 研究對象:
　　 1.病例組
　　 隨機選取2007年4月至2010年5月在河南省二甲以上醫(yī)院神經內科住院的缺

5、血性腦血管病患者400例,其中男238例,女162例,年齡51.15.±10.16。所有病例均經臨床檢查(生化檢驗、病史、CT或MRI)確診,所有病例均符合WHO缺血性腦卒中的定義(急性發(fā)生的血管或血液異常導致腦部血液循環(huán)障礙而發(fā)生的神經功能缺損綜合征),頭顱CT或MRI排除出血,癥狀持續(xù)24小時(以上)。
　　 2.對照組
　　 隨機選取同期體檢健康的隨機個體400例,無冠心病、腦血管病和其他周圍血管病史,其中男235

6、例,女165例,年齡46.00±12.04歲。
　　 以上兩組研究對象均是在研究對象知情同意的原則下進行。均為河南地區(qū)漢族人,飲食結構相似,各研究對象之間排除癲癇、接受器官移植、癌癥及肝腎功能不全等疾病患者。
　　 研究方法:
　　 取研究對象外周靜脈血5 mL加EDTA抗凝,用常規(guī)的酚／氯仿法提取DNA。設計合成引物,PCR儀擴增獲得目的片段,用ApaLI、SspI限制性內切酶酶切,2.5％瓊脂糖凝膠電泳檢測基

7、因型,在紫外分析凝膠成像儀上觀察基因型并照相分析。
　　 統(tǒng)計學處理:
　　 所有數據處理均采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理,ICVD組與正常人群之間基因型頻率和等位基因頻率的差異用x2檢驗,并計算比數比(OddsRatio,OR)及95％可信區(qū)間(CI),以估計基因突變對疾病發(fā)生的相對危險度,檢驗水準α=0.05。用Hardy-Weinberg(HWE)平衡檢驗估計群體調查資料的可靠性。HWE平衡檢驗應用S

8、HEsis軟件(P>0.05)；單倍體型分析采用Shesis軟件。
　　 結果:
　　 1.在河南漢族人群中,PDE4D基因rs918592和rs2910829位點基因型頻率的分布均符合Hardy-weinberg平衡(P>0.05),具有良好的人群代表性。
　　 2.在河南漢族人群中,PDE4D rs918592位點在ICVD組和對照組相比,基因型頻率和等位基因頻率差異有統(tǒng)計學意義(P

9、分析結果顯示,在男性ICVD組與對照組之間差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 3.對PDE4D rs918592和rs2910829位點按照年齡進行分層分析,rs918592和rs2910829位點在小于等于45歲的ICVD組與對照組間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；rs918592位點在大于45歲的ICVD組與對照組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 4.rs918592位點在顯性、隱性模式下和I

10、CVD相關(P<0.05),在疊加模式下其AA基因型和ICVD相關(P<0.05)。
　　 5.在河南漢族人群中,對PDE4D rs918592 A／G和rs2910829 C／T兩個位點在ICVD組與對照組間進行單倍型分析,G-T和A-T單倍型差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 6.在河南漢族正常人群中PDE4D rs918592和rs2910829位點多態(tài)性存在種族差異。
　　 結論:
　　 1