VKORC1基因多態(tài)性與河南漢族人群缺血性腦血管病的相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的:
　　 缺血性腦血管病(ischemic cerebrovascular disease,ICVD)是目前發(fā)病率、致殘率和死亡率都比較高的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,其發(fā)生、發(fā)展是一個非常復雜的過.程,是一種多基因遺傳病,受遺傳和環(huán)境因素相互作用的影響,其中遺傳因素起著非常重要的作用。ICVD的遺傳因素受到多種層次、水平和途徑的限制,目前經(jīng)各國學者研究發(fā)現(xiàn)的與ICVD相關(guān)的基因多態(tài)性有以下幾個方面:①凝血系統(tǒng)；②腎素-血管緊張素系

2、統(tǒng)；③脂代謝系統(tǒng)；④同型半胱氨酸代謝系統(tǒng):⑤炎癥反應(yīng)；⑥基質(zhì)沉積；⑦其他。本課題對凝血系統(tǒng)中的維生素K環(huán)氧化物還原酶亞單位1(Vitamin K epoxide reductase subunit1,VKORC1)基因-1639A/G和1173C/T位點多態(tài)性與河南漢族人群的缺血性腦血管病的易感性的相關(guān)關(guān)系進行研究,并參考文獻與其他國家和地區(qū)的多態(tài)性分布作比較。
　　 維生素K是脂溶性維生素,由于具有促進凝血的功能,故又稱凝血維

3、生素。維生素K依賴性蛋白有:Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ凝血因子,這些因子有促凝血作用；蛋白質(zhì)C,蛋白質(zhì)S和蛋白質(zhì)Z,具有抑制凝血功能。這些蛋白質(zhì)因子發(fā)揮活性均依賴于谷氨酸殘基關(guān)鍵的羧化作用,維生素K則是谷氨酸殘基羧化作用的輔因子。依賴維生素K的羧化反應(yīng)是在肝細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進行的,在血液凝固過程中,凝血酶原分子N末端具有的γ-羧基谷氨酸殘基經(jīng)羧化與Ca2+螯合,被蛋白酶水解而轉(zhuǎn)變?yōu)槟?。凝血酶原上特定的谷氨酸殘基的羧基?是在依賴于維生素K的谷氨酸羧化

4、酶催化下完成的。一旦缺乏維生素K,則不能形成正常的凝血酶原,不能轉(zhuǎn)化為凝血酶,繼而影響血液凝固。因此,維生素K是凝血酶原中谷氨酸殘基羧化作用的輔因子。VKORC1是肝臟內(nèi)維生素K循環(huán)的關(guān)鍵酶,它能把無活性的氧化型維生素K還原為有活性的還原型維生素K,促進維生素K的循環(huán)利用,從而使維生素K依賴性的凝血因子得以維持穩(wěn)定水平。由于VKORC1參與血管生成及凝血機制,所以對心腦血管疾病的發(fā)病風險有一定的影響。
　　 VKORC1基因內(nèi)存

5、在著大量的多態(tài)性位點,由于VKORC1蛋白是華法林作用的受體,VKORC1基因多態(tài)性與華法林的劑量關(guān)系成為當前研究的熱點,但是,目前尚未見VKORC1-1639A/G基因多態(tài)性與腦血管疾病的相關(guān)性研究報道,VKORC11173C/T基因多態(tài)性與腦血管病的研究在國內(nèi)也未見報道。本研究利用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù),在河南漢族人群中對VKORC1-1639A/G和1173C/T位點多態(tài)性進行檢測,探討其分布情

6、況,并進一步探討該位點多態(tài)性與ICVD是否關(guān)聯(lián)。
　　 研究對象:
　　 1.病例組：選取2006年7月至2009年8月在河南省二甲以上醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的ICVD患者370例,經(jīng)臨床檢查(病史、體征、生化檢驗、CT或MRI)確診,ICVD的診斷參照第四屆腦血管會議修定缺血性腦血管病的診斷標準。排除心源性栓塞、低血容量、感染所致的腦梗死和無癥狀性腦梗死。其中男221例,女149例,年齡(59.9±11.6)歲。
　　

7、 2.對照組：選自同期健康體檢的隨機個體408例,無腦血管病、冠心病和其他周圍血管病史,其中男266例,女142例,年齡(52.9±12.7)歲。
　　 以上兩組研究對象均為河南地區(qū)漢族人,飲食結(jié)構(gòu)相似,各研究對象之間無血緣關(guān)系,排除癲癇、癌癥及肝腎功能不全、接受器官移植、嚴重營養(yǎng)不良等疾病患者。均是在研究對象知情同意的原則下進行。
　　 研究方法:
　　 采集研究對象外周靜脈血3 mL,EDTA抗凝,常規(guī)酚/

8、氯仿法提取基因組DNA。設(shè)計引物,PCR擴增目的片段,限制性內(nèi)切酶MspⅠ、StyⅠ酶切,2％瓊脂糖凝膠電泳檢測基因型,在紫外分析凝膠成像儀上觀察基因型并照相分析。統(tǒng)計學處理:
　　 統(tǒng)計并計算ICVD患者與正常人群的基因型頻率和等位基因頻率。用°Hardy-Weinberg平衡檢驗樣本是否具有群體代表性。以上所有數(shù)據(jù)均采用SPSS15.0軟件包進行統(tǒng)計學處理。用x2檢驗計算ICVD組與正常人群之間基因型頻率和等位基因頻率的差異

9、,并計算比數(shù)比(Odds Ratio,OR)及95％可信區(qū)間(CI),以估計基因突變對疾病發(fā)生的相對危險度,檢驗水準a=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1、VKORC1-1639A/G和1173C/T位點基因型頻率的分布均符合Hardy-weinberg平衡(P>0.05),具有良好的人群代表性。
　　 2、VKORC1-1639A/G和1173C/T位點在ICVD組和對照組相比,基因型頻率和等位基因頻率差異有統(tǒng)

10、計學意義(P<0.05)。
　　 3、VKORC1-1639A/G和1173C/T按照性別進行分層分析,在男性ICVD組與對照組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 4、對VKORC1-1639 A/G和1173C/T兩個位點在ICVD組與對照組間進行單倍型分析,兩組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 5、VKORC1-1639A/G和1173C/T位點多態(tài)性存在種族差異。
　　 結(jié)論: