石斛杞片功效成分及緩解視疲勞功能試驗(yàn)研究.pdf

1、近年來，人們患眼疾的情況已經(jīng)日趨嚴(yán)重，現(xiàn)代人長時間對著電視機(jī)和計算機(jī)，縮短了眼睛休息的時間；加上慢性病如糖尿病、高血壓，使視網(wǎng)膜病變、白內(nèi)障、青光眼等發(fā)病率大增。石斛杞片是以葉黃素，β-胡蘿卜素及原花青素為主要活性成分的保健品，本課題主要以主要活性成分來制定該產(chǎn)品的檢測方法，測定活性成分的含量并進(jìn)行其安全性毒理實(shí)驗(yàn)和緩解視疲勞功能研究。為石斛杞片進(jìn)行質(zhì)量控制以及對其他緩解眼視疲勞片研究提供依據(jù)具有重要意義。本課題研究內(nèi)容主要包括兩大方面

2、：
　　一、石斛杞片活性成分含量測定研究
　　1、 HPLC對照品替代法同時測定石斛杞片中葉黃素和β-胡蘿卜素含量方法的研究
　　方法：60℃中超聲3 min水解，0.1％BHT的乙腈溶液超聲處理30 min，定容；色譜柱Thermo-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：A甲醇、B水和C四氫呋喃組成，梯度洗脫；流速1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長為474 nm。
　　結(jié)果：葉黃素平均含量

3、值為11.52mg/g，平均回收率為99.55%， RSD=2.47%；β-胡蘿卜素平均含量為3.49mg/g，平均回收率為98.92%，RS D=4.69%。本實(shí)驗(yàn)首次用對照品替代法測定葉黃素和β-胡蘿卜素準(zhǔn)確性高，簡單方便，具有實(shí)際應(yīng)用價值，可以推廣使用。
　　2、 HPLC-M S檢測葉黃素以及分析葉黃素電離機(jī)理
　　方法：以乙腈為提取溶劑，超聲提取葉黃素；色譜柱Thermo Beta Basic-18(150 mm×

4、2.1 mm，5μm)；流動相：甲醇-0.8%甲酸水（95:5）；流速0.2mL/min；柱溫：30℃；離子源ESI(+)；掃描模式MS3；一級掃描采用源內(nèi)裂解全掃描；二三級掃描采用碎片離子掃描。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)采用源內(nèi)裂解-全掃描模式，使葉黃素失去甲苯特征碎片離子，再對475.2[M-C7H8]+進(jìn)行二級三級掃描，得到質(zhì)荷比為457.2、439.3、362.4的分子離子。首次采用源內(nèi)裂解后的分子離子作為二三級母離子，為葉黃素定性

5、提供新的思路和數(shù)據(jù)。
　　3、香草醛-鹽酸法測定石斛杞片中原花青素含量研究
　　方法：60%甲醇為提取液，40℃超聲提取45 min；加入6 ml4%香草醛甲醇溶液與3 mL濃鹽酸，避光反應(yīng)30 min，用甲醇作空白對照，在波長500 nm處測定吸光度。
　　結(jié)果：香草醛法測定原花青素含量為3.78%，平均回收率為98.8%，RSD為2.86%。
　　4、高效液相色譜法測定石斛杞片中原花青素含量
　　方法：

6、甲醇為提取液，超聲提取45min；色譜柱Ultimate ColumnTMC18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：乙腈-水（5:95，v/v）；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：280 nm；進(jìn)樣量：10μL。
　　結(jié)果：高效液相色譜法測定原花青素平均含量為38.1mg/g，平均回收率為98.9%， RSD為3.40%。
　　二、石斛杞片安全性實(shí)驗(yàn)及緩解視疲勞功能試驗(yàn)研究
　　1、石斛杞

7、片安全性實(shí)驗(yàn)研究
　　方法：30天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)（觀察動物的一般形態(tài)、動物體重變化與食物利用率差異、大鼠血常規(guī)檢查結(jié)果、血清生化檢驗(yàn)結(jié)果、對大鼠臟體比的影響、對大鼠臟體比的影響）；急性毒性實(shí)驗(yàn)；Ames實(shí)驗(yàn)；小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)；小鼠精子畸變試驗(yàn)。
　　結(jié)果：說明該產(chǎn)品無毒性，無致突變性。
　　2、石斛杞片緩解視疲勞功能試驗(yàn)研究
　　方法：120名志愿者采用隨機(jī)雙盲法分成對照組和樣品組，樣品組食用受試物，對照組