瘦素誘導心肌細胞肥大作用機制及內源性腎上腺糖皮質激素對血管炎癥反應抑制作用研究.pdf

1、第一部分瘦素誘導心肌細胞肥大作用機制 目的： 瘦素(Leptin)是一種肥胖基因(ob gene)編碼的蛋白質，近年來的研究資料顯示，肥胖病人血漿的Leptin濃度明顯增高，血漿Leptin濃度與心肌肥厚程度密切相關。目前認為，Leptin在肥胖相關心血管疾病中發(fā)揮著重要作用。研究已經證實，Leptin能誘導心肌細胞內氧活性物質(ROS)的增加和ROS依賴的心肌細胞肥大，內皮素-1(ET-1)受體通路參與該過程，但是由于

2、ET-1受體阻斷劑并未能完全阻斷Leptin的作用，說明仍有其他途徑參與其中。Leptin能激活過氧化物增生因子活化受體α(PPARα)，通過激活脂肪組織的PPARα而影響脂肪酸的轉運和氧化代謝，目前有研究顯示，PPARα的過度表達可以造成小鼠的心肌肥厚，但PPARα活化是否涉及瘦素誘導的心肌細胞肥大仍不清楚。本課題主要探討在瘦素誘導心肌細胞肥大的過程中PPARα所發(fā)揮的作用。 方法： 選用原代培養(yǎng)的新生SD乳鼠心肌細胞

3、。細胞內熒光信號用熒光倒置顯微鏡檢測。用ROS敏感的熒光探針2，7-dichloronuorescin dictate(DCF-DA)反映細胞內ROS水平；用RNA敏感的熒光探針碘化丙叮(PI)檢測細胞內RNA含量；用考馬斯亮蘭法檢測細胞內總蛋白含量。采用熒光定量PCR法檢測心肌細胞內PPARα mRNA表達的變化，Western-blot法檢測心肌細胞PPARα蛋白表達的變化。 結論： Leptin能夠劑量依賴性的誘導

4、心肌細胞內PPARα mRNA和蛋白表達增加；PPARα拮抗劑可以抑制Leptin誘導的心肌細胞內ROS含量增加和心肌細胞肥大；PPARα的活化在Leptin誘導的心肌細胞內ROS含量增加和心肌細胞肥大的過程中發(fā)揮重要的介導作用。 第二部分內源性腎上腺糖皮質激素對內毒素誘導的血管炎癥反應抑制作用研究 目的: 血管內皮的損傷與多種心血管疾病相關，是心血管疾病的獨立危險因素。氧化應激和炎癥反應已被確認為血管內皮細胞損

5、傷的重要機制，但目前對內源性抗炎系統在炎癥反應的調控作用認識還處于初級階段。本實驗研究目的是探討生理水平腎上腺糖皮質激素對血管炎癥反應的抑制作用。 方法： 本實驗分體內試驗和體外試驗兩部分。(1)體外試驗：原代培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)，經形態(tài)學和免疫組化鑒定后，用第3-5代進行試驗。分別給予0-80 μg/ml等不同濃度的脂多糖(LPS)作用內皮細胞2小時，收集細胞上清液；同時用10 μg/ml刺激細胞，分別在

6、0、30分鐘、1小時、2小時、4小時、8小時等6個時間點收集細胞上清液，用ELISA法檢測TNF-α含量。(2)體內試驗：將180-220 g正常SD大鼠分為三大組，分別給予不同濃度的RU486(腎上腺糖皮質激素拮抗劑)、不同濃度的TSA(HDAC抑制劑)和摘除雙側腎上腺處理后，以1 mg/kg腹腔注射LPS，作用1小時，取大鼠胸主動脈提取組織蛋白，ELISA法檢測TNF-α含量。 結論： 分別阻斷糖皮質激素受體、抑制H