腫瘤壞死因子-α及其Ⅱ型受體基因多態(tài)性與石棉肺的研究.pdf

1、石棉肺是一種吸入石棉纖維引起，由炎性細(xì)胞因子介導(dǎo)的纖維化性肺病，其特征為長期慢性肺泡炎和間質(zhì)性腫纖維化，是一個(gè)反復(fù)損傷和修復(fù)并存的過程。雖然已經(jīng)進(jìn)行了大量的研究，其發(fā)病機(jī)理仍然不是很清楚。 當(dāng)前普遍認(rèn)為肺泡巨噬細(xì)胞接觸或吞入石棉纖維后被激活，但不能進(jìn)一步降解粉塵顆粒。炎性細(xì)胞因子和其他促纖維化因子釋放，引起炎癥反應(yīng)，繼而纖維細(xì)胞增殖和膠原蛋白沉積。細(xì)胞因子在免疫反應(yīng)、炎癥和纖維化中起重要作用。細(xì)胞因子在肺部疾病的作用受到越來越廣

2、泛的關(guān)注，主要有白細(xì)胞介素-1、6、TNF-α、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、血小板源性生長因子(PDGF)，胰島素樣生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)等。動物實(shí)驗(yàn)和臨床研究已明確證明TNF-α在炎癥反應(yīng)和纖維化中扮有重要作用。Discroll等體外實(shí)驗(yàn)證明暴露于溫石棉或青石棉的肺泡巨噬細(xì)胞分泌TNF水平增加，另外塵肺患者中TNF-αmRNA轉(zhuǎn)錄水平增高。TNF過度表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠自發(fā)形成肺纖維化，敲除TNF-α受體的小鼠可免于發(fā)展成為肺纖維化

3、。 TNF基因是一個(gè)自體免疫性疾病和炎癥性疾病的候選基因，位于HLA-B和HLA-C2位點(diǎn)之間的MHC三類基因區(qū)內(nèi)，由TNFA和TNFB組成，分別編碼TNF-α和TNF-β，這個(gè)區(qū)域包含了5個(gè)微衛(wèi)星和多個(gè)單核苷酸多態(tài)性。其中兩個(gè)多態(tài)性位于TNF-α基因啟動子區(qū)域-308位點(diǎn)和-238位點(diǎn)，存在G向A的突變。-308位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性被認(rèn)為與TNF-α分泌水平有關(guān)，TNF-α基因-308A能使TNF-α分泌水平增高，并和各種自體免

4、疫性、炎癥性疾病如煤工塵肺、瘧疾、慢性支氣管炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡有關(guān)。YucesoyB等首先發(fā)現(xiàn)TNF-α-238位點(diǎn)與矽肺的嚴(yán)重程度有關(guān)，而-308位點(diǎn)多態(tài)性使患中重度矽肺的危險(xiǎn)性增加。Crobett等證實(shí)在南非金礦黑人礦工中，TNF-α啟動子區(qū)域-308、-238、-376位點(diǎn)與矽肺的嚴(yán)重程度有關(guān)。 TNF-α是通過其受體超家族TNFR1(p55)和TNFR2(p75)發(fā)揮其生物學(xué)作用的。TNFR1(p55)傳遞細(xì)胞毒效應(yīng)和觸

5、發(fā)NF-κB激活。TNFR2(p75)則介導(dǎo)NF-κB激活，刺激細(xì)胞增殖以及調(diào)制腫瘤壞死因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。編碼TNFR2基因位于1p36，其外顯子6(196位點(diǎn))存在T向G的突變，可能會導(dǎo)致生物學(xué)活性的改變，繼而影響TNF-α的作用。 本研究的主要目的是通過對石棉肺患者及接塵工人腫瘤壞死因-α(TNF-α)-308位點(diǎn)及其Ⅱ型受體196位點(diǎn)基因多態(tài)型的研究，探討其在石棉肺發(fā)病遺傳易感性中的作用及其與塵肺纖維化程度的聯(lián)系，為制定

6、石棉肺易感人群監(jiān)測指標(biāo)和石棉肺一級預(yù)防，特別是個(gè)體化預(yù)防提供理論依據(jù)。 根據(jù)國家塵肺診斷標(biāo)準(zhǔn)GBZ70-2002，選擇石棉肺患者37例，石棉接觸者(對照)52例為研究對象。排除患有免疫系統(tǒng)疾病及對照中患有肺部疾病者。根據(jù)X-線胸片，石棉肺患者又分別分為Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期。采取每人外周靜脈血3ml，根據(jù)改良鹽析法提取DNA，PCR擴(kuò)增含有TNF-α(-308G/A)和TNFRⅡ(196T/G)位點(diǎn)的基因。利用限制性內(nèi)切酶NcoⅠ、Nla

7、Ⅲ分別對PCR產(chǎn)物消化分型，鑒定上述位點(diǎn)基因。采用分組和1∶1匹配的病例對照研究方法，比較TNF-α(-308G/A)和TNFRⅡ(196T/G)位點(diǎn)基因多態(tài)性在各組間的分布差別，同時(shí)還采用Logistic回歸分析方法探討在石棉塵肺發(fā)病過程中基因之間、基因與暴露之間的交互作用。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)1)TNF-α基因-308A在石棉肺患者和石棉接觸者中的分部頻率分別為13.5％和3.85％，P=0.018，TNFRⅡ基因196G在石棉肺患者

8、和石棉接觸者中的分布頻率分別是12.2％和7.7％，P=0.317。2)石棉肺患者和石棉塵接觸者1∶1匹配后，TNF-α(-308)突變基因型(G/A+A/A)的OR為8，χ2=4，P＜0.05；TNFRⅡ基因196突變型(T/G+G/G)OR為3，χ2=1.125，P＞0.05。 就目前資料研究結(jié)果分析，我們認(rèn)為TNF-a-308位點(diǎn)基因多態(tài)性與石棉肺的發(fā)生有關(guān)，而與其嚴(yán)重程度無關(guān)；TNFR196位點(diǎn)基因多態(tài)性可能與石棉肺發(fā)病