HBV野生株與變異株對HepG2和L02細(xì)胞感染的初步研究.pdf

1、目的：
　　 采用HBV變異株與野生株病毒血清感染HepG2和L02細(xì)胞，評價這兩種細(xì)胞是否可被HBV自然感染，并探討二者復(fù)制能力是否有差異。
　　 方法：
　　 分別收集ADV變異株、LAM變異株及野生株的HBV感染患者血清。用2％ DMSO培養(yǎng)液培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞和人正常肝細(xì)胞系L02細(xì)胞4天后，用收集的患者血清分別感染這兩種細(xì)胞，于感染后0、1、2、4、6、8、10天收集細(xì)胞上清，采用時間分辨熒

2、光免疫分析法檢測細(xì)胞上清中HBsAg水平；實(shí)時定量PCR法檢測細(xì)胞上清中HBV DNA含量。收集感染后0、24h、48h、96h時間點(diǎn)的細(xì)胞，細(xì)胞免疫熒光法檢測細(xì)胞中HBcAg的定位。
　　 結(jié)果：
　　 1.HepG2和L02細(xì)胞上清中HBsAg含量均呈遞增趨勢，在感染后第2天達(dá)到最高峰，之后逐漸下降。
　　 2.兩種細(xì)胞上清中HBV-DNA的量均呈遞增趨勢，在感染后第4天達(dá)到最高峰，以后呈下降趨勢；
　

3、　 3.24h后在兩種細(xì)胞胞質(zhì)中首次見強(qiáng)信號的HBcAg，呈均勻分布，而胞核中未見陽性表達(dá)物；48h后可在細(xì)胞核中看見紅色標(biāo)記物，而胞質(zhì)中HBcAg表達(dá)減弱；96h后細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中HBcAg的表達(dá)均減少。
　　 4.ADV變異株、LAM變異株、HBV野生株病毒血清感染HepG2后檢測細(xì)胞上清中HBsAg和HBV DNA含量，分別比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。其中 ADV變異株與LAM變異株相比，結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（p

4、＞0.05），其它兩兩相比結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。
　　 5.ADV變異株、LAM變異株、HBV野生株病毒血清感染L02后檢測細(xì)胞上清中HBsAg量，相互比較，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。其中ADV變異株與HBV野生株相比，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05），其它兩兩相比結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 HBV變異株和野生株的病毒血清可感染HepG2和L02細(xì)胞，HBV變異株的