2-甲氧基雌二醇對骨髓增生異常綜合征細胞株MUTZ-1作用的體外研究.pdf

1、目的：以人高危骨髓增生異常綜合征細胞株MUTZ-1細胞為研究對象，研究2-ME對MUTZ-1細胞的生長抑制和誘導凋亡作用，并進一步探討2-MENMUTZ-1細胞作用的可能機制，探索新的更加有效的MDS治療方法。 方法：常規(guī)懸浮細胞培養(yǎng)，MUTZ-1細胞與2-ME孵育后，MTT法檢測2-ME對細胞增殖活力的影響；通過抗原CDIIb和CDl4測定，觀察細胞膜抗原表達及細胞分化成熟；通過LDH檢測，觀察2-ME對細胞膜完整性的影響；用

2、光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)；流式細胞儀術(shù)Annexin-V<'FITC>/PI雙染色法檢測細胞磷脂酰絲氨酸轉(zhuǎn)位和PI染色分析細胞周期的變化；JC-1染色后檢測細胞線粒體膜電位的變化；DCFH-DA染色檢測細胞內(nèi)ROS的改變；瓊脂糖凝膠電泳觀察DNA"梯狀"條帶；用發(fā)光比色法檢測caSpase-3活性；采用RT-PCR技術(shù)檢測抗凋亡基因Mcl-1、XIAP和促凋亡基因Bax mRNA表達。 結(jié)果： 1)0.5μmol/L2-M

3、E作用MUTZ-1細胞2周后，細胞分化抗原CD11b和CD14表達無明顯差異(P>0.05)。 2)1～16μmol/L2-ME能夠抑制MUTZ-1細胞生長，隨著作用時間的延長和藥物濃度增加，2-ME對細胞的生長抑制作用增強，與對照組相比有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。 3)4μmol/L2-ME作用MUTZ-1細胞12h后，呈現(xiàn)典型的凋亡細胞形態(tài)特征。 4)MUTZ-1細胞與2-ME孵育36h后，培養(yǎng)上清液中LD

4、H含量隨著作用時間的延長和藥物濃度的增加而明顯升高，與對照組相比均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 5)流式細胞儀檢測結(jié)果顯示1～8μmol/L2-ME具有誘導MUTZ-1細胞凋亡的作用，隨著時間的延長和藥物濃度的增加，細胞凋亡率增高，與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 6)2-ME作用MUTZ-1細胞12h后，G<,0>/G<,1>期細胞和S期細胞逐漸減少，G<,2>/M期細胞明顯增多，細胞阻滯于G<,2>/M期

5、。 7)2-ME作用MUTZ-1細胞6h后，細胞△ψm強度下降(9.4±1.8)％，4μmol/L2-ME作用18h時細胞△ψm降低到最大值(88.4±4.2)％，隨著作用時間的延長，△ψm下降減緩；4μmol/L2-ME作用MUTZ-1細胞6h后，細胞內(nèi)ROS升高(75.8±3.2)％，18h時ROS升高到最大值(162.4±4.7)％，且ROS升高與相應(yīng)時間點的△ψm下降成正相關(guān)(r=0.036，p<0.05)。隨著2-ME

6、濃度的增加，細胞內(nèi)ROS水平與對照組相比明顯增多。 8)2-ME作用MUTZ-1細胞24h后，DNA凝膠電泳可見明顯的DNA"梯狀"條帶，條帶亮度具有濃度依賴性。 9)caspase-3活性隨著2-ME濃度增加和作用時間的延長而逐漸增強。 10)在一定條件下，隨著2-ME濃度的增加，MUTZ-1細胞中Mcl-lmRNA表達量逐漸降低，與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；XIAP mRNA和Bax mRNA表

7、達量未見明顯變化(P>0.05)。 結(jié)論： 1)低濃度2.ME(<0.5μmol/L)對MUTZ-1細胞誘導分化作用不明顯。 2)2-ME對MDS細胞株MUTZ.1細胞有明顯的生長抑制作用，呈現(xiàn)時效關(guān)系，在一定范圍內(nèi)存在量效關(guān)系。2-ME體外抗腫瘤作用可能與MUTZ-1細胞G2/M期阻滯有關(guān)。 3)2.ME能夠誘導MDS細胞凋亡，在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)時間和劑量依賴性，誘導MDS細胞凋亡是2-ME抗腫瘤作用的機