2-甲氧基雌二醇復(fù)方緩釋凝膠劑研究.pdf

1、2-甲氧基雌二醇(2-ME)是雌激素的內(nèi)源性代謝產(chǎn)物，近年來國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，該化合物對多種癌細胞有較好的作用效果，且具有雌激素活性極低、對正常細胞毒性低、機體耐受性良好的特點。目前在國外將其作為一種新型抗腫瘤藥物，處于Ⅱ期臨床研究階段。2-ME的抗腫瘤作用具有時間濃度依賴性，然而，由于其溶解度小(磷酸鹽緩沖液pH6～7，2.3～3.3μg/ml)，口服生物利用度低，其注射劑體內(nèi)代謝快，半衰期約為24min，使其很難長期維持有效的血藥濃度

2、，因此，如何提高并維持2-ME在靶部位有效的藥物濃度是其制劑學(xué)研究的主要問題。另外，抗腫瘤藥或CYP450代謝酶抑制劑與2-ME進行組方是否能增強2-ME的抗腫瘤效果也值得研究。本研究以2-ME為主藥，以聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)為藥物載體，制備了2-ME復(fù)方緩釋凝膠，通過注射給藥直接將藥物送到病灶部位，藥物在給藥部位緩慢釋放，從而達到制劑長效緩釋的目的。
　　 本研究通過體外細胞藥效實驗，考察了2-ME對人乳腺癌、前列

3、腺癌、肺腺癌細胞增殖抑制效應(yīng)的時間濃度依賴性，研究了2-ME聯(lián)合磺胺苯吡唑、玫瑰樹堿、紫杉醇分別對以上細胞的抑制作用，以腫瘤細胞增殖抑制率為指標，篩選出聯(lián)合抗腫瘤活性較好的處方。實驗結(jié)果表明，2-ME的抗腫瘤作用在一定濃度范圍內(nèi)具有時間濃度依賴性;紫杉醇與2-ME聯(lián)合用藥能有效的抑制腫瘤細胞的增殖，兩藥聯(lián)合呈協(xié)同作用，確定紫杉醇為2-ME復(fù)方制劑的組分。2-ME與紫杉醇聯(lián)合有協(xié)同效應(yīng)，但其聯(lián)合用藥最佳配比及安全用藥劑量，有待于進一步體內(nèi)

4、藥效研究。
　　 建立了高效液相色譜法測定復(fù)方制劑中紫杉醇和2-ME含量的分析方法，流動相為甲醇∶水(67.5∶32.5)，流速為0.8 ml·min-1，柱溫30℃，紫外檢測器(227nm)。分別以藥物濃度和峰面積進行線性回歸得到2-ME和紫杉醇的回歸方程:2-ME的定量方程為A=30.17C+1.3063(r=0.9999)，日內(nèi)、日間精密度分別為1.42％、1.56％，回收率為100.24％(RSD=1.38％);紫杉醇的

5、定量方程為A=52.674C+1.0117(r=1.0)，日內(nèi)、日間精密度分別為0.91％、1.06％，回收率為100.43％(RSD=0.94％)。該方法符合樣品分析的要求。
　　 聚乳酸-羥基乙酸共聚物(polylactic-co-glycolic acid，PLGA)由乳酸和羥基乙酸兩種單體隨機聚合而成，丙交酯比例越小越易降解，共聚物特性粘度(Inherent Viscosity，Ⅳ)越小，降解越快，而特性粘度與聚合度相關(guān)

6、，因此，通過調(diào)整單體比及聚合度，可以改變PLGA的降解時間。據(jù)相關(guān)報道，PLGA50/50(Ⅳ0.15～0.45)體外降解時間約為1～2月，PLGA65/35(Ⅳ0.55～0.75)體外降解時間約為3～4月，PLGA75/25(Ⅳ0.55～0.75)體外降解時間約為4～5月，PLGA85/15(Ⅳ0.55～0.75)體外降解時間約為5～6月。本研究以PLGA50/50(Ⅳ=0.22)為藥用輔料，NMP為注射溶媒，通過考察不同投藥比制劑的

7、體外釋放度，篩選出最佳處方。體外釋放結(jié)果表明，處方制劑可持續(xù)釋放31d以上，具有明顯的緩釋作用。
　　 對2-ME復(fù)方制劑進行了初步安全性評價，結(jié)果顯示，NMP對小鼠皮膚有一定的刺激性，部分小鼠皮膚表面出現(xiàn)少量紅斑，給藥10d后炎癥反應(yīng)明顯減輕，通過病理切片觀察并未發(fā)現(xiàn)制劑對小鼠的主要臟器有明顯的毒副作用，表明該制劑安全性較好。
　　 通過皮下注射給藥考察了制劑的體內(nèi)釋放，結(jié)果顯示，制劑在體內(nèi)有一定的突釋現(xiàn)象，6d釋放了

8、30％，15d累積釋放了50％左右，31d內(nèi)制劑釋放84.8％。體內(nèi)釋放符合一級動力學(xué)模型，釋藥速度先快后慢。
　　 本研究采用皮下接種腫瘤細胞懸液的方法建立動物腫瘤模型，以抑瘤率為考察指標，研究不同給藥組對小鼠乳腺癌的抑制效果。結(jié)果顯示，聯(lián)合用藥組能明顯抑制腫瘤的增殖，2-ME與紫杉醇聯(lián)合呈協(xié)同作用。各給藥組的抑瘤率分別為:紫杉醇組(10 mg/20g)21.93％，2-ME低劑量組(15 mg/20g)7.97％，2-ME高