牙周韌帶細胞與骨髓基質(zhì)細胞促進牙周組織再生能力的比較研究.pdf

1、目的：比較骨髓基質(zhì)細胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)和牙周韌帶細胞(periodontal ligament cells，PDLCs)促進牙周組織再生的能力，為牙周組織的再生治療提供依據(jù)。
　　 方法：1.體外觀察α-MEM、DMEM-LG和RPMI1640三種培養(yǎng)基對Beagle犬BMSCs增殖與分化的影響。2.體外觀察脫細胞真皮基質(zhì)(acellular dermal matrix，ADM)

2、與BMSCs生物相容性；并將ADM作為成骨誘導(dǎo)后BMSCs的載體，植入裸鼠皮下，單純的ADM作為對照組，分別于術(shù)后4W和8W觀察大體標本及組織學(xué)情況。3.體外通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time fluorescence quantitative polymerase chainreaction,Realtime PCR)、免疫細胞化學(xué)染色、Von Kosssa染色等方法比較BMSCs和PDLCs再生組織的能力。4.將雄性裸

3、鼠12只隨機分兩組，每組6只，于每只皮下植入ADM、BMSCs+ADM、PDLCs+ADM。4W和8W后分別處死一組取標本，常規(guī)固定、脫鈣、包埋、切片后進行蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色、Gomori特殊染色和免疫組化染色，以比較BMSCs和PDLCs再生組織的潛能。
　　 結(jié)果：1.α-MEM組24h內(nèi)貼壁的細胞數(shù)目最多；消除貼壁差異后，α-MEM和DMEM促增殖作用相近；α-MEM組堿性磷酸酶(

4、alkaline phosphatase，ALP)表達量最高，但礦化結(jié)節(jié)形成數(shù)目較少，DMEM組礦化結(jié)節(jié)形成個數(shù)最多。2.體外培養(yǎng)觀察BMSCs與ADM有良好的生物相容性；實驗組4W，ADM部分降解吸收，BMSCs在其中生長良好，出現(xiàn)新生組織，部分出現(xiàn)類骨樣結(jié)構(gòu)；8W，ADM大部分吸收，形成大量的新生組織和類骨樣結(jié)構(gòu)：單純ADM組新生組織形成較少，支架材料降解速度與實驗組類似。3.Realtime PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)PDLCs中膠原Ⅻ和

5、骨保護素(osteoprotegerin,OPG)表達量都高于BMSCs(P＜0.05)，ALP表達含量在二者之間差異無顯著性(P＞0.05)；細胞免疫組化染色顯示PDLCs中膠原Ⅻ表達的量高于BMSCs(P＜0.05)，而OPG染色、ALP活性檢測及Von Kosssa染色結(jié)果都表明BMSCs成骨能力高于PDLCs。4.4W和8W組織學(xué)觀察和免疫組化染色顯示BMSCs形成類骨樣結(jié)構(gòu)多于PDLCs，而牙周韌帶形成能力仍小于PDLCs。<