大腸桿菌膜蛋白的亞蛋白質(zhì)組學(xué)分析及其膜蛋白相關(guān)復(fù)合物研究.pdf

1、革蘭氏陰性細(xì)菌的膜蛋白是細(xì)胞與外界自然環(huán)境相接觸的最主要物質(zhì)，在應(yīng)對(duì)外界環(huán)境的變化中起著重要的作用。因此研究細(xì)菌膜蛋白尤其是外膜蛋白的組成，具有深遠(yuǎn)的理論和現(xiàn)實(shí)意義。而對(duì)與膜蛋白相關(guān)的復(fù)合物的研究則有助于我們更深入地了解膜蛋白質(zhì)的功能。 雖然目前已有對(duì)大腸桿菌細(xì)胞膜上的寡聚蛋白質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)的蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定的研究，但是仍沒(méi)有對(duì)其膜蛋白的復(fù)合物以及與膜蛋白相關(guān)聯(lián)的外周蛋白進(jìn)行鑒定的相關(guān)報(bào)道。本文在對(duì)膜蛋白質(zhì)提純方法比較的基礎(chǔ)上，應(yīng)用月

2、桂酰肌氨酸鈉二步法獲得大腸桿菌K12的內(nèi)膜組分，利用IEF技術(shù)建立其分子解剖圖譜。在2D電泳圖譜上所獲得的117個(gè)蛋白點(diǎn)中共鑒定出76種蛋白，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室已建立的大腸桿菌K12的外膜組分圖譜，鑒定出迄今為止最多的31種外膜蛋白質(zhì)。 更重要的是，我們更進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)了一些之前未被認(rèn)識(shí)的膜蛋白復(fù)合物，其中一種通過(guò)western blotting、far-western blotting以及免疫共沉淀等技術(shù)證明外膜蛋白OmpW與延

3、胡索酸還原酶形成復(fù)合物。該復(fù)合物在鐵離子限制條件下，發(fā)生解離。這些研究使我們對(duì)大腸桿菌的外膜有了更深的認(rèn)識(shí)。 同時(shí)，為了對(duì)OmpW所形成的多組分復(fù)合物有更深入的認(rèn)識(shí)，我們研究了不同濃度的鐵離子螯合劑存在下該復(fù)合物的存在情況，以及在鐵離子受到限制的培養(yǎng)基中補(bǔ)加氯化鐵后培養(yǎng)出來(lái)的細(xì)菌中OmpW多組分復(fù)合物的存在情況，另外還研究了4種不同抗生素誘導(dǎo)下大腸桿菌膜蛋白中該復(fù)合物的情況，多項(xiàng)研究結(jié)果表明該復(fù)合物只受到鐵離子的影響，并沒(méi)有受到