膜蛋白質組學在毒理學研究中的應用

1、膜蛋白質組學在毒理學研究中的應用膜蛋白質組學在毒理學研究中的應用黃愛博12、洪文旭1、許華2、劉建軍11深圳市疾病預防控制中心深圳市現(xiàn)代毒理學重點實驗室，廣東深圳518055；2暨南大學藥學院，廣東，廣州，郵編510632基金項目：國家自然科學基金（21102094）；廣東省醫(yī)學科研基金（A2012577）；深圳市科技計劃項目（201102100）；深圳市科技研發(fā)資金基礎研究計劃資助項目（JCYJ20130329161137543）作者

2、簡介：黃愛博，（1989），男，碩士研究生，主要從事蛋白質組學研究。通訊作者：劉建軍，email:bioresearch@摘要：摘要：膜蛋白是細胞膜的重要組成部分，執(zhí)行著細胞內(nèi)外物質交換、細胞識別與免疫應答、信號轉導和調(diào)控，以及能量傳遞等重要功能。隨著蛋白質組學技術的發(fā)展，膜蛋白質組學成為毒理蛋白質組學研究的重要組成部分，為在膜蛋白水平闡明毒理機制和建立毒理評估模型提供了新的途徑。本文綜述了近年來膜蛋白質組學的技術進展以及其在一些毒理學

3、研究中的應用。關鍵詞：關鍵詞：膜蛋白質；蛋白質組學；毒理學皮細胞質筏高疏水性多肽的分離[15]。由RCP，CEX和親水相互作用色譜材料可對MudPIT進行改進。滯留在柱子上的肽段可被不同的緩沖液按梯度洗脫下來[16]。膜蛋白常被同時磷酸化和糖基化。這就是不同模式親和色譜被用于肽段分級純化的原因[17]。固定金屬親和色譜（IMAC）和免疫親和色譜（IAC）可分離胰蛋白酶酶切的磷酸化肽段。通常情況下，IMAC可與RPC及CEX聯(lián)用進而對磷酸

4、化肽段分離，再用電噴霧時間飛行串聯(lián)質譜（ESIQTOFMSMS）進行鑒定。O和N連接的糖肽類常被附有固定凝集素的親和色譜進行富集。IAC常被用做從復雜混合物中分離純化特殊蛋白和蛋白混合物[18]。IAC分離純化鱗狀癌細胞系的磷酸酪氨酸信號網(wǎng)絡蛋白分子。進而用CEXRPC分離胰酶酶切所得肽段，并結合MALDIMS進行鑒定。樣品用不同的去垢劑和離液劑溶解后，結合2DE和熒光差異雙向電泳（2DDIGE）技術分析。上述方法已被用于疏水和翻譯后修

5、飾蛋白的分析[19]。16BACSDSPAGE比傳統(tǒng)2DE（IEFSDSPAGE）在整合膜蛋白的分辨率和范圍上具有顯著的優(yōu)勢，已被應用到分離疏水性膜蛋白。膜蛋白包含共價結合的糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨定物。GPI一般需特定的方法處理，因GPI與膽固醇和鞘糖脂相連，并聚集在質筏上，在細胞膜溶解過程中，對TritonX100具有抗性[20]。磷脂酶C可特定地移除膜錨定物，運用兩相萃取法分離后，去除TritonX114。GPI錨定蛋白留在富含

6、去垢劑的相中，磷脂酶C作用GPI，GPI溶解度增加，進入水相并從質筏殘余疏水蛋白中分離。上述方法一般用作GPI錨定蛋白純化的第一步，在第二步中，電泳分離消化蛋白和LCMSMS鑒定?？蓪φ麄€蛋白混合物進行三氯乙酸（TCA）沉淀并進行蛋白消化和LCMSMS鑒定。也可用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜（MALDITOFMS）和（基質輔助激光解析電離飛行時間串聯(lián)質譜）MALDIQTOFMSMS鑒定[21]。1.2膜蛋白裂解為肽段選擇合適的方法將