羊口瘡病毒陜西株B2L基因的克隆表達(dá)及間接ELISA檢測方法的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、羊口瘡(Orf)是由羊口瘡病毒(Orfvirus,ORFV)引起的傳染性很強(qiáng)的傳染病,呈全球性分布,羔羊?qū)Ρ静≥^為敏感,常造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)擴(kuò)增了ORFV Shaanxi分離株的B2L基因,并對其進(jìn)行了序列分析及原核表達(dá),對表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行純化,并以該重組蛋白為包被抗原,通過優(yōu)化各種條件,初步建立了檢測其抗體水平間接ELISA方法。獲得如下研究結(jié)果:
  1.擴(kuò)增了ORFV Shaanxi分

2、離株的B2L基因,目的基因片段長度為1137bp,測序后,與GenBank中已收錄的其他11株病毒毒株的B2L蛋白進(jìn)行了序列分析,核苷酸序列和氨基酸序列的相似性在95.9%~97.4%和97.8%~99%之間。將目的基因成功連接到原核表達(dá)載體pET-28a,構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET-28a-B2L。在大腸埃希菌原核表達(dá)系統(tǒng)中對重組質(zhì)粒pET-28a-B2L進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),獲得了42kD的B2L重組蛋白。
  2.以純化的B2L重組蛋白為

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