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文檔簡介
1、研究背景:
去整合素金屬蛋白酶8(a disintegrin and metalloproteinase8,ADAM8),是金屬蛋白酶家族(ADAM)的成員之一,近年來被認(rèn)為和哮喘及過敏性疾病有密切關(guān)系。ADAM8首先在巨噬細(xì)胞上發(fā)現(xiàn),隨后的體外實驗發(fā)現(xiàn)其在人B淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等重要免疫細(xì)胞上均有表達。TNF-a、LPS、INF-r、IL-4、IL-13等炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子能刺激細(xì)胞表達ADAM8增加。動物實
2、驗發(fā)現(xiàn),ADAM8 mRNA在哮喘組氣道表達較正常組顯著升高,ADAM8主要表達于哮喘小鼠氣道上皮細(xì)胞及支氣管、血管周圍浸潤的炎癥細(xì)胞。另外,也有研究發(fā)現(xiàn)哮喘患者的氣道ADAM8的表達較正常對照組顯著升高,且其表達量與哮喘病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。同樣,對哮喘患者誘導(dǎo)痰的研究發(fā)現(xiàn),患者痰中的ADAM8 mRNA表達也明顯升高,其表達量與誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)呈正相關(guān)關(guān)系,并與第一秒用力呼氣容積(FEV1)呈負(fù)相關(guān)。此外,在嗜酸性粒細(xì)胞肺炎(
3、EP)的研究中,急性嗜酸性粒細(xì)胞肺炎(AEP)患者支氣管肺泡灌洗液(BALF)的ADAM8蛋白表達顯著增高,并與BALF中IgE的低親和力受體sCD23水平呈正相關(guān)。
目前的研究已初步證實ADAM8參與哮喘等過敏性疾病的病理生理過程。2010年最新的動物實驗發(fā)現(xiàn),ADAM8基因缺失小鼠的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性較野生鼠明顯減輕,因此作者認(rèn)為ADAM8在哮喘發(fā)病中發(fā)揮重要的促炎性作用,ADAM8可作為哮喘治療的靶點之一。但是A
4、DAM8在哮喘中的作用及機制目前仍不清楚,關(guān)于哮喘患者血清中ADAM8的表達變化及其與哮喘嚴(yán)重程度的關(guān)系,國內(nèi)外尚無相關(guān)研究報道。
研究目的:
1、本實驗運用酶聯(lián)免疫吸附法,檢測正常組和哮喘組外周血sADAM8、sCD23的表達水平,分析二者的相關(guān)性及其與血嗜酸性粒細(xì)胞的關(guān)系。
2、檢測哮喘不同病情組血清sADAM8的表達水平,分析其與患者肺功能等臨床指標(biāo)的相關(guān)性,為ADAM8作為一種哮喘診斷及
5、病情分級的指標(biāo)提供實驗依據(jù)。
研究方法
1、ELISA法檢測人外周血sADAM8、sCD23含量
選取南方醫(yī)院2009年3月到5月就診的支氣管哮喘病患者和正常對照兩組人群。其中,哮喘病人15例,男性5例,女性10例;正常人15例,男性9例,女性6例;兩組年齡、性別均無顯著性差異。所以研究對象均已告知試驗研究內(nèi)容,并簽署知情同意書。
按試劑盒寫明的操作步驟,配置好使用試劑,按順序依次
6、添加標(biāo)準(zhǔn)品,血清樣品等到酶標(biāo)板,終止顯色后應(yīng)用全自動酶標(biāo)儀選取450nm測定光密度值,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線并換算樣品的濃度。
2、血清sADAM8測定值與臨床相關(guān)資料的分析
選取2009年6月到11間南方醫(yī)院就診哮喘病患者47例,和正常對照組20例。所以受試者均于本院檢驗科行血常規(guī)五分類檢測,并依次依據(jù)病情分組進行統(tǒng)計,與各自的ADAM8測定值進行比較。
肺通氣功能測定使用6200 AutoboxDL型
7、體積描記儀,按規(guī)定校準(zhǔn)后測定。試驗記錄第一秒用力呼氣容積實測值/預(yù)測值百分比(FEV1%Pred)指標(biāo),比較不同組別間FEVl%Pred,并將肺功能指標(biāo)和血清ADAM8濃度做相關(guān)性分析。
3、統(tǒng)計學(xué)處理
應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,各組結(jié)果以Mean±SD表示。兩樣本均數(shù)的比較采用t檢驗;多組間比較采用單向方差分析(One-Way ANOVA)相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。
結(jié)果
8、> 1、ELISA法檢測外周血sADAM8和sCD23的含量
1)正常對照外周血sADAM8濃度為(237.18±28.03)pg/ml;哮喘組為(391.20±46.32)pg/ml,二者比較有顯著性差異(P<0.01)。
2)正常組sCD23濃度是(1.01±0.24)U/ml,哮喘組(1.54±0.31)U/ml,兩組sCD23濃度相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
3)哮喘組
9、sADAM8和sCD23之間呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.530,P<0.05)。
4)哮喘組sADAM8和EOS之間呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.676,P<0.01)
2、哮喘組外周血sADAM8濃度與病情分級、臨床指標(biāo)間的關(guān)系
1)正常組、哮喘輕度組和中重度組的sADAM8濃度分別為:(241.14±26.06)pg/ml,(332.23±31.41)pg/ml,(421.16±41.13)pg/ml,中
10、重度組的濃度最高,正常組最低。
2)哮喘輕、中重度組sADAM8濃度分別與正常組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.01)。輕度哮喘組與中重度哮喘組sADAM8濃度相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
3)哮喘輕度組sADAM8與肺功能呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.764,P<0.01),中重度組sADAM8與肺功能亦呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.795,P<0.01)。
結(jié)論:
1、哮喘患
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