CTLA-4-IgG4融合蛋白在CHO-DG44細(xì)胞中的高效表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、目的：研究在中華倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary cell，CHO)真核表達(dá)系統(tǒng)中CTLA-4/IgG4融合蛋白的表達(dá)，將質(zhì)粒pMMGR和pMM-CTLA4-IgG4/WG共轉(zhuǎn)染CHO/DG44細(xì)胞；純化所表達(dá)的CTLA-4/IgG4G4融合蛋白，并從中篩選出表達(dá)量最高的陽(yáng)性克隆細(xì)胞，為CTLA-4/IgG4的功能研究和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法：以限制性酶Nde Ⅰ和Not Ⅰ分別對(duì)質(zhì)粒pMMGR和質(zhì)粒p

2、MM-CTLA4-IgG4/WG進(jìn)行限制性酶切消化使其線性化，將線性化的質(zhì)粒pMMGR和pMM-CTLA4-IgG4/WG共轉(zhuǎn)染CHO/DG44細(xì)胞，經(jīng)G418和MTX篩選14天后，對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行無(wú)血清懸浮培養(yǎng)，Westernblot檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中CTLA-4/IgG4融合蛋白的表達(dá)，篩選出高效穩(wěn)定表達(dá)CTLA-4/IgG4融合蛋白的CHO細(xì)胞；Protein A-Agarose親和層析純化所表達(dá)的CTLA-4/IgG4融合蛋白；SD

3、S-PAGE電泳、Western印跡等對(duì)純化的CTLA-4/IgG4融合蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量、純度、抗原特異性進(jìn)行生物學(xué)鑒定。 結(jié)果：篩選出了能高效穩(wěn)定表達(dá)CTLA-4/IgG4融合蛋白的CHO細(xì)胞；純化后的CTLA-4BgG4融合蛋白在SDS-PAGE電泳后出現(xiàn)一條與預(yù)期分子量大小相符的蛋白條帶；該蛋白能與羊抗人IgG-HRP抗體特異結(jié)合。 結(jié)論：獲得了能夠表達(dá)CTLA-4/IgG4融合蛋白的陽(yáng)性克隆CHO/DG44細(xì)胞

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