常見藥用植物內(nèi)生菌根真菌抑菌活性及分子生物學的初步研究.pdf

1、隨著人們對藥用植物內(nèi)生菌根真菌研究的深入，越來越多的藥用植物內(nèi)生菌根真菌的次生代謝產(chǎn)物被分離鑒定，并被證明其中含有與宿主植物相同或相似的有效成分。研究藥用植物內(nèi)生菌根真菌的活性成分、為藥用植物資源尋找合理的替代品已成為當今藥用植物研究的熱點問題之一。本實驗通過對藥用植物內(nèi)生菌根真菌的研究，為其成為藥用植物合理的替代品提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。 本實驗利用組織分離的方法，從常見的16種藥用植物的根部分離得到了11株內(nèi)生菌根真菌。并對其中的5

2、個菌株進行了生物學特陛、抑菌活性、有效化學成份及分子生物學等方面了研究。 供試的5個菌株分別為：分離自桔梗中的內(nèi)生菌根真菌JG1102，分離自防風中的內(nèi)生菌根真菌FF0121，分離自苦參中的內(nèi)生菌根真菌KS1220，分離自玉竹中的內(nèi)生菌根真菌YZ1104，分離自黃芩的內(nèi)生菌根真菌nQin0116。其中，可以通過形態(tài)學，即分生孢子的形態(tài)特征進行鑒定的有4株。即桔梗內(nèi)生菌根真菌JG1102初步鑒定為桔梗鏈格孢(Alternaria

3、platycodonis)，防風內(nèi)生菌根真菌FF0121根鏈格孢(Alternaria radicina)，苦參內(nèi)生菌根真菌KS1220豆鏈格孢(Alternaria azukiea)，玉竹內(nèi)生菌根真菌YZ1104初步鑒定為燕麥鐮孢菌(Fusarium avenaceum)本實驗分別從5種不同的碳源和氮源中，篩選出適宜菌株JG1102、FF0121、KSl220、YZ1104和lHQin0116生長的碳源和氮源。綜合實驗結(jié)果，并本著節(jié)約

4、成本的原則，我們分別選擇了葡萄糖和馬鈴薯作為內(nèi)生菌根真菌培養(yǎng)中的最佳碳源和氮源，即在供試的內(nèi)生菌根真菌的培養(yǎng)中，利用馬鈴薯葡萄糖(PDA)培養(yǎng)基就可以達到最佳的效果。在最適生長溫度的研究中，本實驗確定了20～25℃為內(nèi)生菌根真菌的最適溫度。 從供試的5個菌株中篩選出了3株具有抑制細菌活性的菌株，分別為JG1102、YZ1104和HQin0116。抑菌結(jié)果表明，此3個菌株的發(fā)酵產(chǎn)物、甲醇提取液、乙醇提取液對細菌均有一定的抑菌活性，

5、并且甲醇提取液的抑菌率較乙醇提取液的抑菌率略高。但這3個菌株的水提液對測試細菌則都沒有抑菌活性。 通過薄層層析色譜的分析，分別用黃酮展開劑CHCl<,3>:MeOH(8.5:1.5)和生物堿展開劑CHCl<,3>:MeOH(7:1)(加少量氨水和二乙胺)薄層展開后，10％的濃硫酸顯色，觀察熒光和顯色斑點。結(jié)果表明：菌株JG1102、YZ1104和HQin0116與其宿主原植物含有相同或相似生物堿和黃酮類的有效成分。 以I

6、TS1和ITS4為引物，對KS1220的rDNA進行了PCR擴增，并對擴增產(chǎn)物進行了測序，結(jié)果表明：這種內(nèi)生菌根真菌與已有的土壤真菌的同源相似性較高。 本文的創(chuàng)新點： 本實驗首次采用組織分離和形態(tài)學鑒定的方法，確定了桔梗內(nèi)生菌根真菌JG1102為桔梗鏈格孢，防風內(nèi)生菌根真菌FF0121為根鏈格孢，苦參內(nèi)生菌根真菌KS1220位為鏈格孢，玉竹內(nèi)生菌根真菌YZ1104為燕麥鐮孢菌。 本實驗首次篩選出了3株具有抑制細菌