PEP、DOP-PCR單細(xì)胞多基因位點(diǎn)檢測(cè)研究.pdf

1、全文由兩部分組成:第一部分,單細(xì)胞PEP多基因位點(diǎn)檢測(cè)的研究.目的:探索建立單細(xì)胞PEP全基因擴(kuò)增,后續(xù)巢式PCRβF地中海貧血CD17和nt-28突變基因及連鎖基因(ATTTT)、18和21號(hào)染體短串聯(lián)重復(fù)序列D18S51、D21S11和D21S1411位點(diǎn)檢測(cè)技術(shù),考察單細(xì)胞PEP同步檢測(cè)上述基因位點(diǎn)以及囊性纖維病CF△F508及連鎖基因(GATT)、杜氏肌營養(yǎng)不良癥DMD基因外顯子17和48、Y染色體性別決定基因SRY的擴(kuò)增準(zhǔn)確率

2、,分析單細(xì)胞PEP擴(kuò)增全基因組DNA的完整性.結(jié)果:1、成功建立單細(xì)胞PEP全基因組擴(kuò)增,后續(xù)巢式PCRβ地中海貧血CD17Tnt-28突變基因及連鎖基因(ATTTT)、18和21 號(hào)染色體短患聯(lián)重復(fù)序列D18S51、D21S11和S21S1411位點(diǎn)檢測(cè)技術(shù).2、成功進(jìn)行單細(xì)胞PEP-巢式PCR,上述基因位點(diǎn)以及囊性纖維病CF△F508及連鎖基因(GATT)、杜氏肌營養(yǎng)不良癥DMD基因外顯子17和48、Y染色體性別決定基因SRY10個(gè)

3、位點(diǎn)的同步分析,單個(gè)淋巴細(xì)胞和單個(gè)胚胎細(xì)胞擴(kuò)增準(zhǔn)確率分別達(dá)97.17﹪(583/600)和91.58﹪(174/190).3、單個(gè)淋巴擴(kuò)增PEP后續(xù)巢式PCR擴(kuò)增準(zhǔn)確率高于單個(gè)胚胎細(xì)胞,假陽性率低于胚胎細(xì)胞,兩者有顯著性差異(P<0.05).第二部分,單細(xì)胞DOP-PCR多基因位點(diǎn)檢測(cè)的研究.目的:探索建立單細(xì)胞DOP-PCR全基因組擴(kuò)增,后續(xù)巢式PCR上述10個(gè)基因位點(diǎn)的同步檢測(cè)技術(shù),考察其護(hù)增準(zhǔn)確率,分析單細(xì)胞DOP-PCR擴(kuò)增全基

4、因組DNA的完整性.通過與單細(xì)胞PEP上述各疾病突變基因或位點(diǎn)同步檢測(cè)成功率的比較,考察其在CGH檢測(cè)染色體非整倍體的同時(shí),檢測(cè)或篩查單基因病的可行性.結(jié)論:1、單細(xì)胞PEP后續(xù)巢式PCR同步檢測(cè)囊性纖維病CF△F508及連鎖基因(GATT)、β地中海貧血CD17和nt-28突變基因及連鎖基因(ATTTT)、杜氏肌營養(yǎng)不良癥DMD基因外顯子17和48、Y染色體決定基因SRY、18和21號(hào)染色體短串聯(lián)重復(fù)序列D18S51、D21S11和D