稀有細(xì)胞的單細(xì)胞基因突變檢測(cè).pdf

1、血液內(nèi)存在一些數(shù)量稀少卻具有重要臨床價(jià)值的稀有細(xì)胞，如循環(huán)腫瘤細(xì)胞、循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞、良性的循環(huán)上皮細(xì)胞、以及孕婦外周血中胎兒有核紅細(xì)胞等，其中循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating Tumor Cells，CTCs）因?yàn)榭赡芴崾玖梭w內(nèi)腫瘤的存在與復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，以及成為體內(nèi)除原位病灶以外的腫瘤細(xì)胞的來源而成為了癌癥研究的熱點(diǎn)。目前絕大部分研究主要針對(duì)外周血中全體CTC進(jìn)行計(jì)數(shù)以及基因突變分析，而忽略了CTC的異質(zhì)性，尤其是CTC在遺傳學(xué)上的異質(zhì)性

2、與功能上異質(zhì)性的相互關(guān)系，因此必須發(fā)展針對(duì)單個(gè)CTC的基因檢測(cè)技術(shù)。
　　本文主要基于顯微操作平臺(tái)，用毛細(xì)玻璃管獲取單個(gè)細(xì)胞，然后進(jìn)行全基因組放大，從而擴(kuò)增目的基因并檢測(cè)突變。同時(shí)，我們根據(jù)單細(xì)胞尺度上功能蛋白與基因協(xié)同檢測(cè)的需要，將單個(gè)細(xì)胞在芯片上裂解后先進(jìn)行功能蛋白檢測(cè)，然后抽取單個(gè)細(xì)胞的裂解產(chǎn)物進(jìn)行基因檢測(cè)。最后，我們將基于微流控芯片的外周血中CTC的捕獲技術(shù)與單細(xì)胞基因突變檢測(cè)相結(jié)合，對(duì)肺癌患者進(jìn)行實(shí)際的臨床樣本檢測(cè)。我們