H2S在PI3K-Akt信號通路中對肝纖維化大鼠肝組織中Bad和GSK-3β蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　觀察H2S通過PI3K/Akt信號通路對肝纖維化大鼠肝組織中Bad、GSK3β蛋白表達(dá)的影響，從而探討H2S對肝纖維化的作用。
　　方法：
　　本實驗采用四氯化碳棉籽油背部皮下注射聯(lián)合高脂肪高膽固醇飼料及酒精的復(fù)合因素法建立肝纖維化大鼠模型。將90只SD大鼠購回后適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為2組，即正常對照組(N組)8只，肝纖維化模型組(HF組)82只。自建模第6周開始，將存活的HF組大鼠隨機(jī)分為5組進(jìn)行干預(yù)

2、：肝硬化組(hepatic cirrhosis，C組)14只，DMSO組(D組)12只，LYS294002組(LY組)13只，NaHS干預(yù)組(S組)11只，LYS294002+NaHS組(LS組)13只。干預(yù)劑以腹腔注射，1次/天，共注射12次。具體如下：(1)N組和C組：腹腔注射0.9％氯化鈉注射液，劑量為6mL/kg；(2)D組：腹腔注射2‰DMSO溶液，劑量為6 mL/kg；(3)LY組：腹腔注射LY294002溶液，劑量為0.3

3、mg/( kg·d)；(4)S組：腹腔注射NaHS溶液，劑量為56μmol/(kg·d)；(5)LS組：同時兩側(cè)腹腔分別注入LY294002溶液和NaHS溶液，劑量同LY組和S組。干預(yù)結(jié)束后，宰殺大鼠留取肝臟。經(jīng)HE染色、Masson染色觀察肝組織纖維化及肝組織內(nèi)膠原沉積情況，免疫組織化學(xué)染色觀察肝組織Bad、GSK-3β蛋白的表達(dá)，western blot法檢測肝組織內(nèi)Bad、GSK-3β表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　(1)

4、 HE染色：肝纖維化組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，纖維結(jié)締組織增生、假小葉形成，肝細(xì)胞變性壞死及炎細(xì)胞浸潤明顯。（2）Masson染色：肝纖維化組肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，膠原纖維大量沉積，纖維間隔增多、增寬、致密，可見典型假小葉結(jié)構(gòu)。(3)免疫組織化學(xué)法和Western blot檢測肝組織Bad、GSK-3β蛋白的表達(dá)：與N組、S組比較，C組、D組Bad、GSK-3β表達(dá)增多；與LS組比較，S組Bad、GSK-3β表達(dá)減少，LY組Bad、GSK-3β表達(dá)增