干擾素誘導(dǎo)蛋白16對人血管外膜成纖維細胞增殖與遷移的影響及其機制.pdf

1、目的：研究干擾素誘導(dǎo)蛋白16（interferon-inducible protein16，IFI16）對人腦血管外膜成纖維細胞（human brain vascular adventitial fibroblasts，HBVAF）增殖與遷移的影響及其可能機制，為該蛋白在血管增殖性疾病中的運用提供更多的理論依據(jù)。
　　方法：培養(yǎng)HBVAF細胞，設(shè)未干預(yù)組、干擾素α（interferon alpha，IFN-α）干預(yù)組(用終濃度為2

2、000kU/L~5000kU/L的IFN-α刺激細胞24h)。蛋白免疫印跡（western blotting）法分別測定各組細胞中 IFI16蛋白表達水平。在 HBVAF細胞中轉(zhuǎn)染針對IFI16基因的小分子干擾 RNA(small interference RNA，siRNA)48 h后,用終濃度為2000 kU/L的IFN-α干預(yù)細胞24 h。同時以與IFI16基因無關(guān)的Control siRNA作為陰性對照。實驗設(shè)空白組、Contr

3、ol siRNA組、IFI16 siRNA組、IFN-α組、IFN-α+Control siRNA組、IFN-α+IFI16 siRNA組。流式細胞儀測定細胞周期，細胞劃線法與 transwell法測定細胞遷移能力。應(yīng)用real-time PCR法和western blotting法分別測定細胞中IFI16、p53及p21 mRNA和蛋白表達水平的變化。
　　結(jié)果：與未干預(yù)組比較，IFN-α（2000kU/L~5000kU/L）干

4、預(yù) HBVAF后，IFI16蛋白表達水平明顯上調(diào)（P<0.05)，但不同濃度 IFN-α組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。然而與空白組比較，轉(zhuǎn)染針對IFI16 siRNA后，HBVAF中IFI16、p53及p21 mRNA和蛋白表達水平下調(diào)，增加了細胞G1/S期轉(zhuǎn)換。IFN-α可誘導(dǎo)HBVAF中IFI16、p53及p21 mRNA和蛋白表達水平上調(diào)，同時抑制細胞G1/S期轉(zhuǎn)換與細胞遷移，但在轉(zhuǎn)染了IFI16 siRNA的HBVAF中IFN-α的上述作