疏肝祛瘀通絡(luò)降濁法對非酒精性脂肪肝大鼠肝組織內(nèi)MD2，iNOS表達的影響.pdf

1、研究背景及目的：隨著人民生活水平提高，脂肪肝發(fā)病率越來越高，在某些地區(qū)已成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病<'[1，2]>。除因飲酒所致的酒精性脂肪肝外，非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liverdisease，NAFLD)的發(fā)生率也日見增<'[3，4]>。近年來總結(jié)NAFLD的轉(zhuǎn)歸發(fā)現(xiàn)，50﹪發(fā)展為肝纖維化，15﹪發(fā)展為肝硬化，3﹪發(fā)展為肝衰竭或需進行肝移植<'[5，6]>，5﹪～50﹪的患者就診時即已出現(xiàn)肝纖

2、維化或肝硬化，從而引起了肝病學(xué)者對該病的重視并進行深入研究。Willnet等對90例患者進行回顧性分析，半數(shù)以上與糖尿病、高脂血癥、高血壓、肥胖共同存在<'[7，8]>，大多數(shù)有空腹胰島素升高，由此認(rèn)為NAFLD是代謝綜合征(MS)或胰島素抵抗綜合征在肝臟中的表現(xiàn)。更嚴(yán)重的是其預(yù)后不容樂觀，28﹪的患者發(fā)生肝硬化，其中半數(shù)患者因門脈高壓而需肝移植。 至今為止，NAFLD尚缺乏有效的治療方法，主要是基于對其發(fā)病機制<'[9，10]

3、>的認(rèn)識不足。近年來，細(xì)胞因子在其發(fā)病中的作用漸受重視，本實驗采用高脂飲食誘導(dǎo)大鼠非酒精性脂肪肝，觀察脂肪肝大鼠血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)變化情況，并應(yīng)用疏肝祛瘀通絡(luò)降濁法進行治療，測定肝組織內(nèi)MD2、iNOS的表達水平，探討其治療高脂飲食脂肪肝的可能作用機制，研究疏肝祛瘀通絡(luò)降濁法對非酒精性脂肪肝大鼠肝組織內(nèi)MD2，iNOS表達的影響。 方法：將60只雄性Spague

4、-Dawlay(SD)大鼠隨機分為7組即正常組(C)、模型組(M)、低劑量治療組(LT)、中劑量治療組(MT)、高劑量治療組(HT)、陽性對照組(D)、預(yù)防組(P)，其中模型組、正常組10只，其余每組8只，正常組大鼠每天予以標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料喂養(yǎng)12周，其余各組大鼠每大以高脂飼料(普通飼料+2﹪膽固醇+10﹪豬油)喂養(yǎng)，同時以高脂流食(10﹪膽固醇+20﹪豬油+1﹪膽酸鈉+0.025﹪甲巰咪唑+20﹪丙：醇+20﹪吐溫80+蒸餾水)灌胃12周

5、，自由飲水。其中LT組、MT組、HT組在第5周丌始分別以0.234mg/kg．d、1.17mg/kg.d、5.85mg/kg．d劑量的中藥灌胃，D組在第5周開始以0.0009mg/kg.d的立普妥灌胃，P組則從第1周即開始以1.17mg/kg.d劑量的中藥灌胃。于實驗12周末處死所有大鼠，方法為隔夜禁食，次日稱量體重后，以乙醚麻醉，腹主動脈采血處死，迅速取出肝臟，稱取肝臟濕重，取部分肝組織。常規(guī)HE、蘇丹III染色觀察肝組織的病理改變，

6、測定血清甘油三脂(TG)、丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽固醇(FC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈(RT-PCR)法測定肝組織內(nèi)MD2、iNOS的mRNA的表達。 結(jié)果： 1、動物一般觀察：常規(guī)觀察，正常組大鼠精神充沛，靈活好動，飲食正常：其余各組大鼠精神萎靡，活動減少，體重增長迅速。大體觀察，正常組大鼠肝臟鮮紅質(zhì)地柔軟，有彈性；模型組大鼠肝臟體積增大，呈黃褐色，質(zhì)地稍韌：治療組大鼠肝臟較

7、正常略大，呈較淺淡的黃褐色，質(zhì)地、彈性和韌性較正常組略差。 2、肝組織病理學(xué)變化：4周時，正常組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，中央靜脈大而壁薄，肝細(xì)胞排列成肝索，在中央靜脈周圍呈放射狀分布，細(xì)胞呈多形；模型組大鼠肝細(xì)胞脂肪變性明顯，內(nèi)含較大脂肪滴，肝臟小葉結(jié)構(gòu)消失，中央靜脈周圍有炎細(xì)胞浸潤。 12周后中劑量治療組大鼠HE染色肝組織脂肪變性程度較模型組有較明顯減輕改善，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，有少量炎細(xì)胞浸潤；蘇丹Ⅲ染色肝組織

8、略有棕紅色，較模型組有明顯減少。 3、血清學(xué)指標(biāo)：4周時血清生化檢查結(jié)果顯示：LT、MT、HT、M、P、D組血清中TG、TC、ALT、VDL的指標(biāo)與正常組比較均明顯升高，而HDL卻明顯降低，P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。12周時血清生化檢查結(jié)果顯示：與M組相比，各組TC水平均降低，且P<0.01，有顯著性差異；TG水平在各組均表現(xiàn)為降低，其中在MT組和D組降低有統(tǒng)計學(xué)意義P<0.05：LT組、HT組、D組、P組的ALT水平都降低，唯

9、有在MT組降低有統(tǒng)計學(xué)意義P<0.05；LDL水平在各組都降低，HT組降低不明顯，LT組和D組降低有統(tǒng)計學(xué)意義，MT組和P組降低顯著P<0.01；MT組和P組的HDL水平均升高，且有顯著性P<0.01，其余四組有所升高但不明顯，無統(tǒng)計學(xué)意義。 4、肝組織MD2與iNOSmRNA的表達：12周時C組肝組織內(nèi)MD2mRNA的表達處于一個較低水平，而M組MD2mRNA的表達處于較高水平，與M組比較，LT組、MT組、D組、P組的水平均降

10、低，其中只有MT組有顯著性差異P<0.01，HT組MD2mRNA水平竟有升高。12周時C組肝組織內(nèi)iNOSmRNA的表達亦處于較低水平，而M組iNOSmRNA的表達處于較高水平，其余各組均較低，HT組水平降低不明顯，LT組、MT組、D組、P組降低有顯著性差異。其中，MT組水平與C組水平相當(dāng)。 結(jié)論： 1、髓樣分化蛋白2參與非酒精性脂肪性肝病的病理生理過程。 2、誘生性一氧化氮聚合酶參與非酒精性脂肪性肝病的病理生理