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1、目的:利用微透析(microdialysis,MD)技術(shù)觀察腦室周?chē)踪|(zhì)軟化(PVL)早產(chǎn)鼠腦內(nèi)氨基酸遞質(zhì)動(dòng)態(tài)變化,探討興奮毒性在PVL發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法: 1)3-硝基丙酸腦內(nèi)注射誘導(dǎo)PVL模型建立:新生5天(postnatal day 5,P5)SD大鼠80只,隨機(jī)分成NPA組(40只)和PBS組(40只),腦立體定位儀定位于左側(cè)腦室上方胼胝體,分別注入等量3-NPA和PBS,實(shí)驗(yàn)鼠由母鼠代養(yǎng)至P6~P30不等
2、。64只實(shí)驗(yàn)鼠(每組各32只)于P6,P7,P8,P14處死,灌注固定取腦,取不同腦冠狀面作冰凍切片,作HE染色(P6、P7、P8、P14)及少突膠質(zhì)細(xì)胞O4(P6、P7)、MBP(P8、P14)免疫組織化學(xué)染色,16只實(shí)驗(yàn)鼠(每組各8只)于P28~P30作神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試。 2)微透析實(shí)驗(yàn):3-硝基丙酸(3-NPA)腦內(nèi)注射復(fù)制P5 SD大鼠PVL模型,利用微透析技術(shù),于造模前、造模后15min、30min、45min、60mi
3、n、75min、90min收集透析液,收集完畢移除設(shè)備,實(shí)驗(yàn)鼠由母鼠帶養(yǎng)至P6~P14不等。經(jīng)高效液相色譜(HPLC)定量分析透析液中谷氨酸(glutamate,Glu)、天冬氨酸(aspartic acid,Asp)、甘氨酸(glycine,Gly)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)含量,計(jì)算分析興奮毒性指數(shù)(excitotoxic index,EI)變化。實(shí)驗(yàn)鼠于P6,P7,P8,P14處死,灌注固定
4、取腦,取不同腦冠狀面作冰凍切片,作HE染色。 結(jié)果: 1)在3-硝基丙酸腦內(nèi)注射誘導(dǎo)新生鼠腦室周?chē)踪|(zhì)軟化模型的實(shí)驗(yàn)中,HE染色顯示P6、P7、P8 NPA組皮質(zhì)下及腦室周?chē)踪|(zhì)出現(xiàn)不同程度疏松及液化灶,P14出現(xiàn)腦室擴(kuò)大,腦室指數(shù)較PBS組高,差異具顯著性,腦皮質(zhì)無(wú)明顯變化;O4染色示NPA組陽(yáng)性細(xì)胞較PBS組明顯減少,差異具顯著性;MBP免疫染色示NPA組平均光密度值較PBS組低,差異具顯著性;神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)顯示NP
5、A組出現(xiàn)明顯的神經(jīng)行為學(xué)異常,與PBS組比較有明顯差異。 2)微透析實(shí)驗(yàn)顯示,細(xì)胞外液中Glu與Asp濃度在造模后15min~45min升高,明顯高于造模前水平,隨后恢復(fù)到造模前水平;Gly濃度在造模后15min~75min顯著升高,90min恢復(fù)至造模前水平;GABA濃度在造模后15min~30min時(shí)明顯高于造模前水平,45min后恢復(fù)至造模前水平;反映興奮性神經(jīng)遞質(zhì)與抑制性神經(jīng)遞質(zhì)平衡綜合指數(shù)的EI值在造模后15min~7
6、5min明顯增高,90min恢復(fù)至造模前水平。 結(jié)論: 1)3-NPA腦內(nèi)注射誘導(dǎo)P5新生鼠PVL模型符合腦室周?chē)踪|(zhì)軟化的神經(jīng)病理學(xué)及神經(jīng)行為學(xué)特征,可作為相關(guān)疾病研究的可靠模型。 2)氨基酸遞質(zhì)在PVL的損傷過(guò)程中出現(xiàn)規(guī)律性變化:無(wú)論是興奮性氨基酸還是抑制性氨基酸在損傷的早期階段都出現(xiàn)顯著增高,隨后恢復(fù)至損傷前的水平;反映興奮性神經(jīng)遞質(zhì)與抑制性神經(jīng)遞質(zhì)平衡綜合指數(shù)的EI值亦表現(xiàn)出同樣的規(guī)律性。這表明興奮毒性作
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