人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)未成熟腦腦室周圍白質(zhì)軟化神經(jīng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：建立未成熟腦腦室周圍白質(zhì)軟化(Periventricular leukomalacia，PVL)動(dòng)物模型，經(jīng)腹腔移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells，HUcMSC)，探討HUcMSC在未成熟腦定向遷移以及對(duì)受損腦組織的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　方法：5日齡(P5d)新生大鼠40只隨機(jī)分為遷移組和假手術(shù)組、HuMSCs移植組和磷酸鹽緩沖液(PBS)對(duì)照組；每組

2、各10只乳鼠。每組又根據(jù)處死注時(shí)間的不同隨機(jī)分為生后1天、19天兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)。體外培養(yǎng)HUcMSC；假手術(shù)組只行血管分離，不結(jié)扎左側(cè)頒總動(dòng)脈也不放入缺氧艙內(nèi)。遷移組、HUcMSC移植組和PBS對(duì)照組建立新生大鼠PVL(Periventricular Leucumalacia)動(dòng)物模型。遷移組和假手術(shù)組每只實(shí)驗(yàn)鼠經(jīng)腹腔給予Brdu標(biāo)記的HuMSC1×107/0.05PBSml懸液注射入體內(nèi)，24小時(shí)后(P6d)處死，BrdU免疫組化染色方法

3、觀察HUcMSC在實(shí)驗(yàn)鼠腦內(nèi)的遷移；HUcMSC移植組和PBS對(duì)照組分別在造模后經(jīng)腹腔注射第二代HUcMSC(1×107/0.05PBSml)以及0.05mlPBS無(wú)菌溶液，在第14d，應(yīng)用7.0微型MRI(MicroMRI)掃描觀察HUcMSC對(duì)病變區(qū)域修復(fù)程度，評(píng)估實(shí)驗(yàn)鼠遠(yuǎn)期神經(jīng)行為學(xué)，MBP免疫組化療法觀察移植HUcMSC對(duì)髓鞘形成的影響，評(píng)估HUcMSC對(duì)早產(chǎn)兒PVL的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　結(jié)果：1、BrdU免疫組化染色顯示

4、移植HUcMSC后24小時(shí)，遷移組實(shí)驗(yàn)鼠腦白質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)Brdu染色陽(yáng)性細(xì)胞(2.10士0.99)較假手術(shù)組(0.90±0.74)多，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；2、移植HUcMSC組在干細(xì)胞干預(yù)后24小時(shí)應(yīng)用MicroMRI掃描在T2W2上可見明顯高信號(hào)，第14d在T2W2上未見異常信號(hào)；PBS對(duì)照組大鼠在PBS干預(yù)24小時(shí)后應(yīng)用MicroMRI掃描，在T2W2上可見明顯高信號(hào)，第14d在T1W1可見低信號(hào)，腦白質(zhì)軟化灶形成；3、第1

5、4d，HUcMSC移植組大鼠懸吊試驗(yàn)(3.40±0.966)、曠場(chǎng)試驗(yàn)(1.60±0.516)、拒俘反應(yīng)(3.00±0.816)實(shí)驗(yàn)評(píng)分均較PBS對(duì)照組懸吊試驗(yàn)(1.8±0.789)、曠場(chǎng)試驗(yàn)(0.6±0.516)、拒俘反應(yīng)(1.30±1.059)高，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；4、兩周后移植HUcMSC組髓磷脂堿性蛋白(MBP)染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(13.95±1.57)明顯多于PBS對(duì)照組(10.22±1.02)，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<